Селективная синтетическая питательная среда «Ацинетобактер фенилаланин агар» для выделения и идентификации бактерий комплекса Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii

Цель исследования — клинико-микробиологическая апробация селективной питательной среды «Ацинетобактер фенилаланин агар» для выделения и идентификации бактерий комплекса Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii (комплекса АСВ). В 2018 г. клинико-бактериологической лаборатории Военно-медицинской академии были изучены 400 проб клинического материала (отделяемое ран, кровь, моча, бронхо-альвеолярные смывы) параллельно традиционным методом [посев на кровяной агар, выделение и идентификация чистых культур биохимическими тестами и микробиологическим анализатором «Vitek 2» (bioMerieux)] и посевом на чашки с питательной средой «Ацинетобактер фенилаланин агар». Селективность этой среды обусловлена трофической селекцией ацинетобактеров L-фенилаланином в качестве единственного источника азота и углерода и дополнительной селекцией триметопримом. Ацинетобактеры комплекса АСВ идентифицировали через 18–24 ч инкубации при 37°С по наличию характерных колоний на селективной среде. Контрольные тесты на цитохромоксидазу и ОФ-тест с глюкозой пероксидводородным микрообъемным методом (в течение 1 ч) позволяли в экспресс-режиме отличать ацинетобактеры комплекса АСВ от других бактерий и группы ацинетобактеров неокисляющих глюкозу. Далее определяли вид всех выделенных штаммов ацинетобактеров методом матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации с время пролетной масс-спектрометрией (MALDI-TOF MS). Ацинетобактеры были выделены на селективной среде в 26 пробах (18 проб в монокультуре, 8 — в ассоциации с Pseudomonas aeruginosa или Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae при очень мелких колониях ассоциантов); традиционным методом — в 20 пробах (7 — в монокультуре, 13 — в ассоциациях с синегнойной палочкой, клебсиеллами, эшерихиями, цитробактером, провиденциями, стафилококками, энтерококками, C. albicans). Методом MALDI-TOF MS было установлено, что из 26 штаммов ацинетобактеров, выделенных на селективной среде, 25 относятся к комплексу АСВ (A. baumannii — 23, A. pittii — 2). Один штамм (A. baylyi) не относился к видам комплекса АСВ. Следовательно, диагностическая специфичность селективной синтетической питательной среды «Ацинетобактер фенилаланин агар» по выделению и идентификации бактерий комплекса A. calcoaceticus — A. baumannii составляет 96,2%, а ее диагностическая чувствительность превышает на 25% традиционный метод. Применение селективной среды ускоряет исследование — выделение и идентификация ацинетобактеров комплекса АСВ завершается через 18–24 ч после посева клинического материала. Селективность питательной среды потенциально стабильна, так как ее основной трофический фактор селекции не зависит от приобретенной антибиотикоустойчивости бактерий. Как синтетическая питательная среда она пригодна для стандартизованных исследований.

бактерии комплекса Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii, селективная синтетическая питательная среда, L-фенилаланин, триметоприм, стабильная селекция, стандартизация исследований

1. Патент № 2660567 Российская Федерация, МПК C12Q 1/04 (2006.01); C12N 1/20 (2006.01); C12R 1/02 (2006.01). Способ выделения и идентификации бактерий комплекса Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii: № 2017130632; заявлено 29.08.2017: опубликовано 06.07.2018 / Сиволодский Е.П. Патентообладатель: Сиволодский Е.П. 8 с.

2. Сиволодский Е.П. Пероксидводородный микрообъемный метод ОФ-теста: экспрессное определение окисления и ферментации глюкозы грамотрицательными бактериями // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1991. № 1. С. 14–17.

3. Сиволодский Е.П., Зуева Е.В. Таксономическое и прикладное значение профилей утилизации белковых аминокислот бактерий Acinetobacter baumannii, Acinetobacter pittii, Acinetobacter nosocomialis // Вестник Российской военно-медицинской академии. 2018. № 4 (64). С. 113–116.

4. Cosgaya C., Mari-Almirall M., Van Assche A., Fernandez-Orth D., Mosqueda N., Telli M., Huys G., Higgins P., Seifert H., Lievens B., Roca I., Vila J. Acinetobacter dijkshoorniae sp. nov., a member of the Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii complex mainly recovered from clinical samples in different countries. Int. J. Syst. Evol. Microbiol., 2016, vol. 66, pp. 4105–4111. doi: 10.1099/ijsem.0.001318

5. Gerner-Smidt P., Tjernberg I., Ursing J. Reliablity of phenotypic tests for identification of Acinetobacter species. J. Clin. Microbiol., 1991, vol. 29, no. 2, pp. 277–282.

6. Jawad A., Hawkey P.M., Heritage J., Shnelling A.M. Description of Leeds Acinetobacter medium, a new selective and differential medium for clinically important Acinetobacter spp. and comparison with Herella agar and Holton’s agar. J. Clin. Microbiol., 1994, vol. 32, no. 10, pp. 2353–2358.

7. Nemec A., Krizova L., Maixnerova M., Sedo O., Brisse S., Higgins P.G. Acinetobacter seifertii sp. nov., a member of the Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii complex isolated from human clinical specimens. Int. J. Syst. Evol. Microbiol., 2015, vol. 65, pp. 934–942. doi: 10.1099/ijs.0.000043

8. Nemec A., Krizova L., Maixnerova M., Van der Reijden T.J., Deschaght P., Passet V., Veneechoutte M., Brisse S., Dijkshoorn L. Genotypic and phenotypic characterization of the Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii complex with the proposal of Acinetobacter pittii sp. nov. (formeily Acinetobacter genomic species 3) and Acinetobacter nosocomialis sp. nov. (formerly Acinetobacter genomic species 13 TU). Res. Microbiol., 2011, vol. 162, pp. 393–404.