Preview

Инфекция и иммунитет

Расширенный поиск

Практические аспекты выявления, культивирования и характеристики клинических изолятов вируса varicella-zoster

https://doi.org/10.15789/2220-7619-PAO-1211

Полный текст:

Аннотация

До настоящего времени принято считать, что инфекционность вируса varicella-zoster (VZV — varicella-zoster virus) остается тесно связанной с клеткой, и вновь сформированный вирус не высвобождается в культуральную среду. Известно также, что VZV трудно выращивать в клеточных культурах, поскольку он медленно реплицируется, имеет ограниченный спектр чувствительных клеточных культур. Кроме того, изоляция VZV зависит от вида использованных клеточных культур, характера клинического материала, наличия жизнеспособного вируса и времени транспортировки. Цель работы: изучение продукции инфекционного внеклеточного VZV с использованием различных клеточных культур. Материалы и методы. В работе использовали 8 различных клеточных культур, включая диплоидные клетки легких эмбриона человека и кожно-мышечную ткань эмбриона человека (КМ-27), а также перевиваемые клеточные линии человека и обезьян. В качестве клинических изолятов были использованы корочки от везикулярной сыпи, которые помещали в криопробирки с транспортной средой и транспортировали в жидком азоте. Инфекционность VZV оценивали на инфицированных клеточных культурах по реакции гемадсорбции со взвесью эритроцитов морских свинок или человека с нулевой группой крови и подтверждали в реакции непрямой иммунофлуоресценции с поликлональными сыворотками от людей, переболевших опоясывающим герпесом. Результаты. В работе было исследовано 27 клинических образцов в виде корочек от везикулярной сыпи от пациентов, заболевших ветряной оспой, и один образец от пациента в возрасте 63 лет в фазе обострения рецидивирующего опоясывающего герпеса. Первичное заражение клиническими изолятами проводили на штаммах диплоидных клеток легких эмбриона человека (ЛЭЧ-3) при низких температурах. Было установлено, что корочки от везикулярной сыпи, взятые от пациентов с 1 по 18 сут включительно с момента появления сыпи, вызывали на монослое клеток ЛЭЧ-3 цитопатическое действие в виде цитолиза клеток вокруг корочки. Специфичность ЦПД подтверждали ПЦР-РВ. Для оценки иммунных сывороток были приготовлены вирусные антигены на 7 клеточных линиях, зараженных лабораторным штаммом «Ellen» VZV (США). Была обнаружена высокая специфическая антиVZV активность мышиных сывороток в ИФА при использовании в качестве твердофазного сорбента всех использованных лизатов инфицированных клеточных линий. В экспериментах по репродукции VZV было установлено, что внеклеточный вирус высвобождается в культуральную среду с 1 суток с момента инфицирования чувствительных клеток, и инфекционность вируссодержащей жидкости увеличивается в процессе дальнейшего культивирования.

Об авторах

Ф. Г. Нагиева
ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Россия

Нагиева Фирая Галиевна - д.м.н., зав. лабораторией гибридных клеточных культур отдела вирусологии

115088, Москва, ул. 1-я Дубровская, 15, стр. 1
Тел.: 8 (495) 674-76-45 (служебн.); 8 916 272-79-01 (моб.).



Е. П. Баркова
ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Россия

к.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории гибридных клеточных культур отдела вирусологии

Москва



А. Н. Лисаков
ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Россия

научный сотрудник лаборатории гибридных клеточных культур отдела вирусологии

Москва



А. В. Сидоров
ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Россия

к.б.н., зав. лабораторией генетики ДНК-содержащих вирусов отдела вирусологии

Москва



В. В. Зверев
ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Россия

д.б.н., профессор, академик РАН, научный руководитель института

Москва



О. В. Осокина
ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Россия

к.м.н. зав. инновационным отделом

Москва



А. Д. Строева
ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова
Россия

младший научный сотрудник лаборатории гибридных клеточных культур отдела вирусологии

Москва



Список литературы

1. Фам Х.Ф., Сидоров А.В., Милованова А.В., Антонова Т.П., Лисаков А.Н., Нагиева Ф.Г., Алаторцева Г.И., Свитич О.А., Казанова А.С., Лавров В.Ф., Зверев В.В. Новый подход к диагностике varicella-zoster-вирусной инфекции с использованием ПЦР в режиме реального времени // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2016. Т. 15, № 5. С. 52–58. doi: 10.31631/2073-3046-2016-15-5-52-58

2. Arvin A.M. Varicella-zoster virus. Clin. Microb. Rev., 1996, vol. 9, no. 3, pp. 361–381.

3. Arvin A.M. Varicella vaccine: genesis, efficacy, and attenuation. Virology, 2001, vol. 284, no. 2, pp. 153–158. doi: 10.1006/viro.2001.0918

4. Baiker A., Fabel K., Cozzio A. Varicella-zoster virus infection of human neural cells in vivo. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 2004, vol. 101, no. 29, pp. 10792–10797. doi: 10.1073/pnas.0404016101

5. Depledge D.P., Palser A.L., Watson S.J., Yi-Chun Lai I., Gray E.R., Grant P. Specific capture and whole-genome sequencing of viruses from clinical samples. PLoS One, 2011, vol. 6, no. 11, pp. 1–7. doi: 10.1371/journal.pone.0027805

6. Gershon A.A. Varicella-zoster vaccines and their implications for development of HSV vaccines. Virology, 2013, vol. 435, no. 1, pp. 29–36. doi: 10.1016/j.virol.2012.10.006

7. Gershon A.A., Sherman D.L., Zhu Z., Gabel C.A., Ambron R.T., Gershon M.D. Intracellular transport or newly synthesized varicella-zoster virus: final envelopment in the trans-Colgi network. J. Virol, 1994, vol. 68, no. 10, pp. 6372–6390.

8. Gershon A.A., Steinberg S.P., Gelb L. Clinical reinfection with varicella-zoster virus. J. Infect. Dis., 1984, vol. 149, no. 2, pp. 137–142. doi: 10.1093/infdis/149.2.137

9. Gilden D.H. Varicella-zoster virus vasculopathy and disseminated encephalomyelitis. J. Neurol. Sci., 2002, vol. 195, no. 2, pp. 99–101. doi: 10.1016/S0022-510X(02)00021-7

10. Goaster J.L., Conzalo S., Bouree P., Tangy F., Haenni A.L. Efficacy of the anti-VZV (anti-HSV3) vaccine in HSV1 and HSV2 recurrent herpes simplex disease: a prospective study. Open Access Journal of Clinical Trials, 2012, vol. 4, pp. 51–58. doi: 10.2147/OAJCT.S33292

11. Grose C., Ng T.I. Intracellular synthesis of varicella-zoster virus. J. Infect. Dis., 1992, vol. 166, pp. 7–12. doi: 10.1093/infdis/166.supplement_1.s7

12. Haberthur K., Messaoudi I. Animal models of varicella-zoster virus infection. Pathogens, 2013, vol. 2, no. 2, pp. 364–382. doi: 10.3390/pathogens2020364

13. Levin M.J., Levental S., Masters H.A. Factors influencing quantitative isolation of varicella-zoster virus. J. Clin. Microbiol., 1984, vol. 19, no. 6, pp. 880–883.

14. Reik L.M., Maines S.L., Levin W., Bandirra S., Thomas P.E. A simple, non-chromatographic purification procedure for monoclonal antibodies. Isolation of monoclonal antibodies against cytochrome P450 isozymes. J. Immunol. Methods, 1987, vol. 100, no. 1–2, pp. 123–130.

15. Rice G.P., Casali P., Oldstone M.B. A new solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay for specific antibodies to measles virus. J. Infect. Dis., 1983, vol. 147, no. 6, pp. 1055-1059.

16. Sarkadi J. Varicella-zoster virus vaccine, successes and difficulties. Acta Microbiol. Immunol. Hung., 2013, vol. 60, no. 4, pp. 379–396. doi: 10.1556/AMicr.60.2013.4.1

17. Silver B., Hua Zhu. Varicella-zoster virus vaccines: potential complications and possible improvements. Virologica Sinica, 2014, vol. 29, no. 5, pp. 265–273. doi: 10.1007/s12250-014-3516-9


Дополнительные файлы

1. Метаданные
Тема
Тип Прочее
Скачать (18KB)    
Метаданные
2. Титульный лист
Тема
Тип Прочее
Скачать (18KB)    
Метаданные
3. Резюме
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (15KB)    
Метаданные
4. Рисунок_1.Иммуноферментный анализ: значения ОП450 анти-VZV специфичной мышиной сыворотки (Spf), исследованной на двух сорбентах
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (13KB)    
Метаданные
5. Рисунок_2.Иммнуноферментный анализ: значения ОП490 анти- VZV – специфичной мышиной сыворотки (SpF), исследованной на 6- сорбентах
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (13KB)    
Метаданные
6. Рисунок_3А. Титрование в ИФА сывороток от SpF мышей линии BALB/c, иммунизированных вирусосодержащими жидкостями от восьмого (А) и десятого (Б) пассажей на клетках ЛЭЧ.
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (14KB)    
Метаданные
7. рисунок_3Б. Титрование в ИФА сывороток от SpF мышей линии BALB/c, иммунизированных вирусосодержащими жидкостями от восьмого (А) и десятого (Б) пассажей на клетках ЛЭЧ.
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (14KB)    
Метаданные
8. Рисунок_4. Реакция непрямой иммунофлуоресценции (400X)
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (13MB)    
Метаданные
9. Таблица_1. Информация о пациентах с ветряной оспой и опоясывающим герпесом в г. Москве и в Московской области, у которых были взяты образцы корочек везикулярной сыпи
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (16KB)    
Метаданные
10. Таблица_2. Олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый гибридизационный зонд для выявления ДНК VZV методом ПЦР-РВ
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (12KB)    
Метаданные
11. Таблица_3. Выявление ДНК VZV в клинических образцах от пациентов с ветряной оспой и опоясывающим герпесом методом ПЦР – РВ
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (16KB)    
Метаданные
12. Таблица_4. Инфекционная активность индивидуальных вирусных сборов в различные временные интервалы
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (13KB)    
Метаданные
13. Литература
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (19KB)    
Метаданные
14. Подписи авторов (рус.)
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Посмотреть (252KB)    
Метаданные
15. Подписи авторов (анг.)
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Посмотреть (272KB)    
Метаданные
16. Список рисунков
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (16KB)    
Метаданные
17. Статья (исправлено)
Тема
Тип Прочее
Скачать (51KB)    
Метаданные
18. Резюме (исправлено)
Тема
Тип Прочее
Скачать (15KB)    
Метаданные
19. Таблица_1. Олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый гибридизационный зонд для выявления ДНК VZV методом ПЦР-РВ
Тема
Тип Прочее
Скачать (B)    
Метаданные
20. Таблица_1. Олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый гибридизационный зонд для выявления ДНК VZV методом ПЦР-РВ
Тема
Тип Прочее
Скачать (13KB)    
Метаданные
21. Таблица_2. Информация о пациентах с ветряной оспой и опоясывающим герпесом в г. Москве и в Московской области, у которых были взяты образцы корочек везикулярной сыпи
Тема
Тип Прочее
Скачать (16KB)    
Метаданные
22. Список рисунков (исправлено)
Тема
Тип Прочее
Скачать (17KB)    
Метаданные
23. Список литературы (исправлено)
Тема
Тип Прочее
Скачать (19KB)    
Метаданные
24. рисунок_1 Иммуноферментный анализ: значения ОП450 анти-VZV специфичной мышиной сыворотки (Spf), исследованной на двух сорбентах.
Тема
Тип Прочее
Скачать (13KB)    
Метаданные
25. Рисунок_2 Иммнуноферментный анализ: значения ОП490 анти- VZV – специфичной мышиной сыворотки (SpF), исследованной на 6- сорбентах.
Тема
Тип Прочее
Скачать (13KB)    
Метаданные
26. Рисунок_3А. Титрование в ИФА сывороток от SpF мышей линии BALB/c, иммунизированных вирусосодержащими жидкостями от восьмого (А) и десятого (Б) пассажей на клетках ЛЭЧ-3.
Тема
Тип Прочее
Скачать (14KB)    
Метаданные
27. Рисунок_3Б. A, Б. Титрование в ИФА сывороток от SpF мышей линии BALB/c, иммунизированных вирусосодержащими жидкостями от восьмого (А) и десятого (Б) пассажей на клетках ЛЭЧ-3
Тема
Тип Прочее
Скачать (14KB)    
Метаданные
28. Неозаглавлен
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (6MB)    
Метаданные

Для цитирования:


Нагиева Ф.Г., Баркова Е.П., Лисаков А.Н., Сидоров А.В., Зверев В.В., Осокина О.В., Строева А.Д. Практические аспекты выявления, культивирования и характеристики клинических изолятов вируса varicella-zoster. Инфекция и иммунитет. 2020;10(2):387-396. https://doi.org/10.15789/2220-7619-PAO-1211

For citation:


Nagieva F.G., Barkova E.P., Lisakov A.N., Sidorov A.V., Zverev V.V., Osokina O.V., Stroeva A.D. Practical aspects on identification, cultivation and characteristics of varicella-zoster virus isolates. Russian Journal of Infection and Immunity. 2020;10(2):387-396. (In Russ.) https://doi.org/10.15789/2220-7619-PAO-1211

Просмотров: 68


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2220-7619 (Print)
ISSN 2313-7398 (Online)