Молекулярная диагностика в верификации туберкулезного плеврита в Марокко

Туберкулезный плеврит (pleural tuberculosis — pTB) является очень распространенной формой внелегочного туберкулеза (ТБ). Его диагностика представляет собой серьезную проблему во всем мире из-за недостатков традиционных диагностических методов. К последним относятся микроскопическое исследование плевральной жидкости на наличие кислотоустойчивых микроорганизмов, культивирование микобактерий из плеврального экссудата на твердых или жидких средах и гистологическое исследование биопсии плевры.

В связи с этим наше внимание было направлено на разработку новых диагностических тестов, основанных на амплификации нуклеиновых кислот (ПЦР и РТ-ПЦР), как наиболее точных, быстрых, высокочувствительных и специфичных. В этом контексте данное исследование было проведено для оценки эффективности методов молекулярной диагностики при дифференциации микобактерий туберкулеза и нетуберкулезных микобактерий в плевральном экссудате. Пятьдесят пациентов с плевритом были включены в проспективное исследование в г. Рабат, Марокко. Эффективность ПЦР двух ДНК-мишеней — IS6110 и микобактериального внутреннего транскрибируемого спейсера (MYITS) — для диагностики туберкулезного плеврита оценивали на основании сравнения с результатами гистологического исследования и культивирования. Наши результаты показали, что IS6110-ПЦР может выявить pTB с чувствительностью и специфичностью 41,6 и 85,7% соответственно. Таким образом, полученные результаты подтверждают, что молекулярные тесты имеют относительно высокую специфичность для диагностики внелегочного туберкулеза, но более низкую чувствительность, поэтому положительный результат рассматривается как подтверждение pTB, тогда как отрицательный тест не может исключать заболевание. Хотя исследование было ограничено небольшим размером выборки, оно добавляет к совокупности доказательств полезности молекулярного тестирования в качестве дополнения к гистологическому исследованию для точной диагностики pTB, своевременного лечения и предотвращения появления и распространения лекарственно-устойчивого pTB. Необходимы дальнейшие исследования для повышения чувствительности молекулярных методов и определения оптимальных молекулярных мишеней, которые могут быть полезны в клинической практике.

1. Aggarwal A.N., Gupta D., Jindal S.K. Diagnosis of tubercular pleural effusion. Indian. J. Chest., 1999, vol. 41, no. 2, pp. 89—100.

2. Asghar M.U., Mehta S.S., Cheema H.A., Patti R., Pascal W. Sputum smear and culture-negative tuberculosis with associated pleural effusion: a diagnostic challenge. Cureus, 2018, vol. 10, no. 10: e3513. doi: 10.7759/cureus.3513

3. Cohen L.A., Light R.W. Tuberculous pleural effusion. Turk. Thorac. J., 2015, vol. 16, no. 1, pp. 1—9. doi: 10.5152/ttd.2014.001

4. Diraa O., Elmdaghri N., Laaboudi L., Boudouma M., Gutierrez M.C., Benbachir M. IS6110 restriction fragment length polymorphism of Mycobacterium tuberculosis isolates from an area of Casablanca, Morocco. Int. J. Tuberc. Lung. Dis., 2005, vol. 9, no. 11, pp. 1294-1296.

5. Galimi R. Extrapulmonary tuberculosis: tuberculous meningitis new developments. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci., 2011, vol. 15, no. 4, pp. 365-386.

6. Gholoobi A., Masoudi-Kazemabad A., Meshkat M., Meshkat Z. Comparison of culture and PCR methods for diagnosis of Mycobacterium tuberculosis in different clinical specimens. Jundishapur. J. Microbiol., 2014, vol. 7, no. 2: e8939. doi: 10.5812/jjm.8939

7. Greco S., Girardi E., Masciangelo R., Capoccetta G.B., Saltini C. Adenosine desaminase and interferon gamma measurements for the diagnosis of tuberculous pleurisy: a meta-analysis. Int. J. Tuberc. Lung. Dis., 2003, vol. 7, no. 8, pp. 777-786.

8. Haddaoui H., Mrabet F.Z., Aharmin M., Bourkadi J.E. Multidrug-resistant extrapulmonary tuberculosis: about 7 cases. Pan. Afr. Med. J., 2019, vol. 32: 196. doi: 10.11604/pamj.2019.32.196

9. Hillemann D., Rusch-Gerdes S., Boehme C., Richter E. Rapid molecular detection of extrapulmonary tuberculosis by the automated GeneXpert MTB/RIF system. J. Clin. Microbiol., 2011, vol. 49, no. 4, pp. 1202-1205. doi: 10.1128/JCM.02268-10

10. Jeon D. Tuberculous pleurisy: an update. Tuberc. Respir. Dis., 2014, vol. 76, no. 4, pp. 153-159. doi: 10.4046/trd.2014.76.4.153

11. J0rstad M.D., ABmus J., Marijani M., Sviland L., Mustafa T. Diagnostic delay in extrapulmonary tuberculosis and impact on patient morbidity: a study from Zanzibar. PLoS One, 2018, vol. 13, no. 9: e0203593. doi: 10.1371/journal.pone.0203593

12. Lee J.Y. Diagnosis and treatment of extrapulmonary tuberculosis. Tuberc. Respir. Dis., 2015, vol. 78, no. 2, pp. 47-55. doi: 10.4046/trd.2015.78.2.47

13. Light R.W. Pleural effusion in pulmonary embolism. Semin. Respir. Crit. Care. Med., 2010, vol. 31, no. 6, pp. 716-722. doi: 10.1055/s-0030-1269832

14. Makeshkumar V., Madhavan R., Narayanan S. Polymerase chain reaction targeting insertion sequence for the diagnosis of ex-trapulmonary tuberculosis. Indian J. Med. Res., 2014, vol. 139, no. 1, pp. 161—166.

15. Mehta P.K., Raj A., Singh N., Khuller G.K. Diagnosis of extrapulmonary tuberculosis by PCR. FEMS Immunol. Med. Microbiol., 2012, vol. 66,pp. 20-36. doi: 10.1111/j.1574-695x.2012.00987.x

16. Mokaddas E., Ahmad S. Development and evaluation of a multiplex PCR for rapid detection and differentiation of Mycobacterium tuberculosis complex members from non-tuberculous mycobacteria. Jpn. J. Infect. Dis., 2007, vol. 60, no. 2-3, pp. 140-144.

17. Molaudzi M., Molepo J. The use of real-time polymerase chain reaction and an adenosine deaminase assay for diagnosing pleural tuberculosis. Afr. J. Lab. Med., 2019, vol. 8, no. 1: 731.

18. Pang Y., An J., Shu W., Huo F., Chu N., Gao M., Qin S., Huang H., Chen X., Xu S. Epidemiology of extrapulmonary tuberculosis among inpatients, China, 2008-2017. Emerg. Infect. Dis., 2019, vol. 25, no. 3, pp. 457-464. doi: 10.3201/eid2503.180572

19. Roychowdhury T., Mandal S., Bhattacharya A. Analysis of IS6110 insertion sites provides a glimpse into genome evolution of Mycobacterium tuberculosis. Sci. Rep., 2015, vol. 5: 12567. doi: 10.1038/srep12567

20. Sankar M.M., Singh J., Diana S.C., Singh S. Molecular characterization of Mycobacterium tuberculosis isolates from North Indian patients with extrapulmonary tuberculosis. Tuberculosis (Edinb.), 2013, vol. 93, no. 1, pp. 75-83. doi: 10.1016/j.tube.2012.10.005

21. Seibert A.F., Haynes J. Jr., Middleton R., Bass J.B. Jr. Tuberculous pleural effusion. Twenty-year experience. Chest, 1991, vol. 99, no. 4, pp. 883-886.

22. Tyagi S., Sharma N., Tyagi J.S., Haldar S. Challenges in pleural tuberculosis diagnosis: existing reference standards and nucleic acid tests. Future Microbiol., 2017, vol. 12, pp: 1201-1218. doi: 10.2217/fmb-2017-0028

23. WHO. Global tuberculosis Report 2018. Geneva: WHO, 2018. URL: https://apps.who.int/medicinedocs/documents/s23553en/s23553en.pdf (11.11.2019)

24. Zhai K., Lu Y., Shi H.Z. Tuberculous pleural effusion. J. Thorac. Dis., 2016, vol. 8, no. 7, pp. E486-E494. doi: 10.21037/jtd.2016.05.87