СПОСОБ ФЕНОТИПИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ACINETOBACTER NOSOCOMIALIS

Резюме. Цель исследования – разработка способа идентификации бактерий вида Acinetobacter nosocomialis по совокупности фенотипических признаков с использованием признака уреазной активности. Объектами исследования были 116 штаммов бактерий группы Acinetobacter baumannii (Ab) и 2 штамма Acinetobacter calcoaceticus. Клинические штаммы были выделены в 2018-2019 годах в бактериологической лаборатории Военно-медицинской академии им.С.М. Кирова (Санкт-Петербург), из них A. baumannii – 85 штаммов, A. nosocomialis – 12 штаммов, A. pittii – 10 штаммов. Кроме того, девять штаммов A. nosocomialis были выделены из проб воды, взятой из реки Невы в городской черте Санкт-Петербурга. Два штамма A. calcoaceticus из коллекции НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера были изолированы из цианобактериальных матов Антарктиды. Принадлежность штаммов к группе A. baumannii (Ab) устанавливали по совокупности фенотипических признаков: грамотрицательные кокко-бактерии, неподвижные, аэробы, растут при 37⁰С, 41⁰С или 44⁰С, не дают гемолиз на среде с кровью барана; не имеют цитохромоксидазы и нитратредуктазы, имеют каталазу; не ферментируют, но окисляют D-глюкозу на среде Хью-Лейфсона и микрометодом; утилизируют этанол, L-арабинозу, L-аргинин, L-гистидин, путресцин, трикарбаллиловую кислоту на плотной минимальной солевой среде с 0,2% субстрата в качестве единственного источника углерода;  не утилизируют D-глюкозу. Штаммы бактерий культивировали на Колумбийском агаре. Уреазную активность бактерий определяли микрообъемным методом. Использовали  среду с мочевиной  рН=7,0±0,1 следующего состава: Na₂HPO₄ - 1,1 г; KH₂PO₄  - 1,1 г; NaCl - 5,0 г;  0,4% водно-щелочной раствор фенолового красного - 5 мл; мочевина 10,0÷15,0 г; вода дистиллированная - 1л. Ингредиенты, кроме мочевины, растворяли в дистиллированной воде, разливали во флаконы, стерилизовали 20 мин при 121^оС, затем добавляли во флаконы мочевину в расчетном количестве. Среду с мочевиной вносили по 0,1 мл в лунки планшета, затем засевали по полной петле (диаметром 2 мм) суточной агаровой культуры исследуемых и контрольных штаммов и инкубировали в аэробных условиях при 37 °C. Результаты реакции на уреазу быстрой активности учитывали через 3 часа по изменению исходной окраски среды. Для выявления уреазы слабой активности реакцию учитывали через 7 - 24 часа. Полученные данные уреазной активности сравнивали с результатами видовой идентификации всех исследуемых штаммов методом матрично-ассоциированной лазерной десорбции/ионизации время пролетной (MALDI-TOF) масс-спектрометрии. Было установлено, что у бактерий группы Ab уреазную активность имели 100% штаммов A. nosocomialis и 18,82% штаммов A. baumannii. При этом уреазу быстрой активности имели все штаммы A. nosocomialis и только один  штамм A. baumannii (1,17%). У бактерий видов A. pittii и A. calcoaceticus уреаза как быстрой, так и слабой активности не была выявлена. Следовательно, уреаза высокой активности имеет таксономическое значение как маркер бактерий вида A. nosocomialis отличающий этот вид от других видов группы A. baumannii. Чувствительность и специфичность способа идентификации штаммов A. nosocomialis, основанного на определении уреазы быстрой активности в совокупности с фенотипическими признаками группы Ab, относительно идентификации методом MALDI-TOF масс-спектрометрии исследуемых штаммов составили 100% и 98,83% (χ²=103,2; Р<0,0001) соответственно.