Preview

Инфекция и иммунитет

Расширенный поиск

НОВЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МУТАЦИИ УСТОЙЧИВОСТИ ВИРУСА ГЕПАТИТА B К АНАЛОГАМ НУКЛЕОЗ(Т)ИДОВ M204I/V У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ B

https://doi.org/10.15789/2220-7619-2015-3-265-272

Полный текст:

Аннотация

Для лечения хронического гепатита В (ХГВ) широко используются аналоги нуклеоз(т)идов (АН), такие как ламивудин (ЛАМ), телбивудин (ТБВ), адефовир (АДФ), энтекавир (ЭНТ). Однако длительное применение этих препаратов часто приводит к развитию лекарственной устойчивости. Наиболее часто встречаются замены метионина на валин в 204 положении обратной транскриптазы (rtM204V), либо метионина на изолейцин (rtM204I). Раннее выявление мутаций устойчивости к АН имеет большое значение для определения стратегии лечения пациентов с ХГВ. В настоящее время существует много высокочувствительных технологий обнаружения мутаций устойчивости, таких как секвенирование нового поколения, метод обратной гибридизации с использованием олигонуклеотидных зондов (LiPA), масс-спектрометрический метод. Однако эти методы требуют дорогостоящего оборудования и реактивов, поэтому их использование в клинических лабораториях пока не получило широкого применения. Целью данной работы было разработать простой и точный метод для определения мутации rtM204I/V, основанный на ПЦР в реальном времени. Разработанный метод показал высокую специфичность и чувствительность (1000 копий/мл), он менее трудоемок, не нуждается в дополнительном оборудовании, более быстрый и экономичный в сравнении с другими методами. Мутации устойчивости ВГВ к АН определяли в 5 группах пациентов с ХГВ. Пациенты первой группы получали монотерапию пегилированным интерфероном (n = 12), второй группы — ламивудином (n = 10), третьей группы — телбивудином (n = 7), четвертой группы — энтекавиром (n = 15). В пятую группу вошли пациенты, не получавшие противовирусную терапию (n = 3). Среди обследованных 47 пациентов с ХГВ распространенность мутаций в YMDD-мотиве полимеразы у пациентов, получавших ламивудин, составила 10%, энтекавир — 20%, телбивудин — 28%. У двух пациентов были выявлены последовательности YIDD/YVDD и у одного — YMDD/ YIDD. ПЦР-метод обнаружения мутаций устойчивости ВГВ rtM204I/V к АН с детекцией в режиме реального времени может быть использован для первичного скрининга пациентов с ХГВ, не отвечающих на лечение АН. Применение данного метода ограничит число образцов для углубленного изучения первичных и компенсаторных мутаций устойчивости к АН методом секвенирования. При сравнении разработанного метода с широко используемым секвенированием по Сенжеру, данный метод более быстрый, экономичный и способен выявлять минорные варианты популяции ВГВ. 

Об авторах

Е. А. Елпаева
197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17, ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ.
Россия

научный сотрудник лаборатории молекулярной вирусологии и генной инженерии ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия;



А. Б. Комиссаров
197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17, ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ.
Россия

старший научный сотрудник лаборатории молекулярной вирусологии и генной инженерии ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия; 



М. М. Писарева
197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17, ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ.
Россия

к.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной вирусологии и генной инженерии ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия;



М. П. Грудинин
197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17, ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ.
Россия

к.б.н., зав. лабораторией молекулярной вирусологии и генной инженерии, зам. директора по науке и развитию ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия; 



О. И. Киселев
197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17, ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ.
Россия

академик РАН, д.б.н., профессор, директор ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия



Список литературы

1. Елпаева Е.А., Порецкова Е.А., Ковеленов А.Ю., Аликян И.С., Гальбрайх Р.Б., Грудинин М.П., Эсауленко Е.В. Генотипическая характеристика вируса гепатита В у хронически инфицированных больных // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2009. № 15. С. 56–59. [Elpaeva E.A., Poretskova E.A., Kovelenov A.Yu., Alikyan J.S., Galbraikh R.B., Grudinin M.P., Esaulenko E.V. Genotypic characterization of the hepatitis B virus in chronically infected patients. Dal’nevostochnyi zhurnal infektsionnoi patologii = Far Eastern Journal of Infection Pathology, 2009, no. 15, pp. 56–59. (In Russ.)]

2. Елпаева Е.А., Писарева М.М., Никитина О.Е., Кижло С.Н., Грудинин М.П., Дуданова О.П. Роль мутантных форм вируса гепатита B в прогрессирующем течении хронического гепатита В // Ученые записки Петрозаводского государственного университета. Естественные и технические науки. 2014. Т. 143, № 6. С. 41–46. [Elpaeva E.A., Pisareva M.M., Nikitina O.E., Kizhlo S.N., Grudinin M.P., Dudanova O.P. The role of the mutant forms of hepatitis B virus in the progressive course of chronic hepatitis B. Uchenye zapiski Petrozavodskogo gosudarstvennogo universiteta. Estestvennye i tekhnicheskie nauki = Scientific Notes of Petrozavodsk State University. Natural and Engineering Sciences, 2014, vol. 143, no. 6, pp. 41–46. (In Russ.)]

3. Dandri M., Locarnini S. New insight in the pathobiology of hepatitis B virus infection. Gut, 2012, vol. 61, no. 1, pp. 6–17. doi:10.1136/gutjnl-2012-302056

4. Feng Z.L., Yu X.Y., Lu Z.M., Geng D.Y., Zhang L., Chen S.J. Rapid detection of the hepatitis B virus YMDD mutant using AllGlo™ probes. Clin. Chim. Acta., 2011, vol. 412, iss. 11–12, pp. 1018–1021. doi: 10.1016/j.cca.2011.02.012

5. Gao S. Clinical relevance of hepatitis B virus variants. World J. Hepatol., 2015, vol. 7, no. 8, pp. 1086–1096. doi: 10.4254/wjh.v7.i8.1086

6. Hua W., Zhang G., Guo S., Li W., Sun L., Xiang G. Microarray-based genotyping and detection of drug-resistant HBV mutations from 620 Chinese patients with chronic HBV infection Brazilian. J. Infect. Dis., 2015, vol. 19, no. 3, pp. 291–295. doi: 10.1016/j.bjid.2015.03.012

7. Ko S.-Y., Oh H.-B., Park C.-W., Lee H.C., Lee J.-E. Analysis of hepatitis B virus drug-resistant mutant haplotypes by ultra-deep pyrosequencing. Clin. Microbiol. Infect., 2012, vol. 18, no. 10, pp. 404–411. doi: 10.1111/j.1469-0691.2012.03951.x

8. Lin C.-L., Kao J.-H. Hepatitis B virus genotypes and variants. Cold Spring Harb. Perspect. Med., 2015, vol. 5, no. 5, pp. a021436–a021436. doi: 10.1101/cshperspect.a021436

9. Locarnini S., Yuen L. Molecular genesis of drug-resistant and vaccine-escape HBV mutants. Antivir. Ther., 2010, vol. 15, no. 3, pp. 451–461. doi: 10.3851/IMP1499

10. Locarnini S., Zoulim F. Molecular genetics of HBV infection. Antivir. Ther., 2010, vol. 15, no. 3, pp. 3–14. doi: 10.3851/IMP1619

11. Niesters H.G.M., Zoulim F., Pichoud C., Buti M., Shapiro F., D’Heuvaert N., Celis L., Doutreloigne J., Sablon E. Validation of the INNO-LiPA HBV DR assay (version 2) in monitoring hepatitis B virus-infected patients receiving nucleoside analog treatment. Antimicrob. Agents Chemother., 2010, vol. 54, no. 3, pp. 1283–1289. doi: 10.1128/AAC.00970-09

12. Rybicka M., Stalke P., Dreczewski M., Smiatacz T., Bielawski K.P. High-throughput matrix-assisted laser desorption ionizationtime of flight mass spectrometry as an alternative approach to monitoring drug resistance of hepatitis B virus. J. Clin. Microbiol, 2014, vol. 52, no. 1, pp. 9–14. doi: 10.1128/JCM.01891-13

13. Shi M., Yang Z.J., Wang R.S., Zhang H., Zhu Y.F., Xu Y.P., Lin Q.Y., Jin L.J. Rapid quantitation of lamivudine-resistant mutants in lamivudine treated and untreated patients with chronic hepatitis B virus infection. Clin. Chim. Acta., 2006, vol. 373, iss. 1–2, pp. 172–175. doi: 10.1016/j.cca.2006.05.023

14. Stuyver L.J., Locarnini S.A., Lok A., Richman D.D., Carman W.F., Dienstag J.L., Schinazi R.F. Nomenclature for antiviralresistant human hepatitis B virus mutations in the polymerase region. Hepatology, 2001, vol. 33, no. 3, pp. 751–757. doi: 10.1053/jhep.2001.22166

15. Wang R.S., Zhang H., Zhu Y.F., Han B., Yang Z.J. Detection of YMDD mutants using universal template real-time PCR. World J. Gastroenterol., 2006, vol. 12, no. 8, pp. 1308–1311. doi: 10.3748/wjg.v12.i8.1308


Для цитирования:


Елпаева Е.А., Комиссаров А.Б., Писарева М.М., Грудинин М.П., Киселев О.И. НОВЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МУТАЦИИ УСТОЙЧИВОСТИ ВИРУСА ГЕПАТИТА B К АНАЛОГАМ НУКЛЕОЗ(Т)ИДОВ M204I/V У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ B. Инфекция и иммунитет. 2015;5(3):265-272. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2015-3-265-272

For citation:


Elpaeva E.A., Komissarov A.B., Pisareva M.M., Grudinin M.P., Kiselev O.I. NEW METHOD FOR DETERMINING HEPATITIS B VIRUS RESISTANCE MUTATIONS M204I/V TO NUCLEOS(T)IDE ANALOGUES IN PATIENTS WITH CHRONIC HEPATITIS B. Russian Journal of Infection and Immunity. 2015;5(3):265-272. (In Russ.) https://doi.org/10.15789/2220-7619-2015-3-265-272

Просмотров: 441


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2220-7619 (Print)
ISSN 2313-7398 (Online)