УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ K. OXYTOCA

В статье представлены результаты исследования, связанные с повышением эффективности выделения фагов бактерий вида K. oxytoca, за счет разработки оптимального состава среды, используемой в работе. В научных исследованиях практически во всех методиках, связанных с выделением бактериофагов, в качестве питатель- ной основы используются мясопептонный бульон и мясопептонный агар. Особенности роста и культивирования микроорганизмов создают определенные сложности для выделения фагов, активных в отношении бактерий вида K. oxytoca. Подбор компонентов и создание среды, которая обеспечивала бы оптимальный рост как бактериальной культуры, так и репродукции вируса позволяет облегчить работу по выделению бактериофагов. Число бактериальных штаммов, используемых в работе — 7. Все штаммы культур получены из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВО Ульяновский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина. Исследования включали в себя 2 основных этапа. Первый этап включал выделение бактериофагов из внешней среды по методике Адельсона Л.И., Ляшенко Е.А. Материалом для исследований были пробы почвы, сточных вод, фекалий (2) — всего 4 пробы. Согласно выбранной методике, высев предполагаемого фаголизата осуществляли на мясопептонный агар (1,5%) и предлагаемый нами агар для выделения бактериофагов (АФ) (1,5%). Положительным результатом считали наличие на среде негативных колоний, хорошо видимых на матовом фоне глубинного роста бактерий. Отрицательным результатом —сплошной рост («га- зон») бактериальной культуры. В качестве контроля использовали посев изучаемого микроорганизма на данные среды. В ходе проводимых исследований по первому этапу было выделено 2 бактериофага, активных в отношении искомого вида микроорганизма. Второй этап заключался в сравнительном анализе показателей культивирования выделенных фагов на стандартном мясопептонном агаре и предлагаемой среде для выделения бактериофагов. Также были определены основные биологические свойства изучаемых фагов: морфология негативных колоний, литическая активность, специфичность. Образовавшиеся на сравниваемых средах негативные колонии отнесли к одному типу. Литическая активность изучаемых фагов на мясопептонном агаре и среде АФ была одинаковой. По Грациа 2 × 10⁷ БОЕ/мл для бактериофага КО-3 УГСХА, (3–4) × 10⁸ БОЕ/мл для бактериофага КО-8724 УГСХА. Выделенные бактериофаги не проявили литическую активность в отношении штаммов гетерогенных культур (Escherichia spp., Citrobacter spp., Serratia spp., Hafnia spp., Yersinia spp.).

1. Бульканова Е.А., Золотухин С.Н. Выделение бактериофагов рода Klebsiella из сточных вод // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2004. № 12. С. 40–42. [Bulkanova E.A., Zolotukhin S.N. Isolation of bacteriophages of the genus Klebsiella from wastewater. Vestnik Ul’yanovskoi gosudarstvennoi sel’skokhozyaistvennoi akademii = Vestnik of Ulyanovsk State Agricultural Academy, 2004, no. 12, pp. 40–42. (In Russ.)]

2. Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Садртдинова Г.Р. Сравнительная эффективность методов выделения бактериофагов Klebsiella oxytoca // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2015. № 4 (32). С. 68–72. [Vasilyev D.A., Zolotukhin S.N., Sadrtdinova G.R. Comparative effectiveness of methods of isolation of bacteriophages Klebsiella oxytoca. Vestnik Ul’yanovskoi gosudarstvennoi sel’skokhozyaistvennoi akademii = Vestnik of Ulyanovsk State Agricultural Academy, 2015, no. 4 (32), pp. 68–72. (In Russ.)]

3. Захаренко С.М. Бактериофаги: современные аспекты применения, перспективы на будущее // Медицинский совет. 2013. № 10. С. 72–75. [Zakharenko S.M. Bacteriophages: present and future aspects of use. Meditsinskii sovet = Medical Advice, 2013, no. 10, pp. 72–75. (In Russ.)]

4. Золотухин Д.С., Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Семенов А.М., Романова Е.М. Выделение, селекция и изучение биологических свойств бактериофагов Hafnia alvei // Вестник ветеринарии. 2013. № 1 (64). С. 68–70. [Zolotukhin D.S., Vasilyev D.A., Zolotukhin S.N., Semenov A.M., Romanova E.M. The isolation, selection and observation of biological characteristics of Hafnia alvei bacteriophages. Vestnik veterinarii = Herald of Veterinary Medicine, 2013, no. 1 (64), pp. 68–70. (In Russ.)]

5. Катмакова Н.П., Золотухин С.Н., Васильев Д.А. Поиск и селекция псевдотуберкулезных бактериофагов // Ветери-нарная медицина. 2009. № 4. С. 19–20. [Katmakova N.P., Zolotukhin S.N., Vasilyev D.A. The search and selection of bacteriophages Yersinia pseudotuberculosis strains. Veterinarnaya meditsina = Veterinary Medicine, 2009, no. 4, pp. 19–20. (In Russ.)]

6. Ляшенко Е.А., Золотухин С.Н., Васильев Д.А. Разработка и применение фагового биопрепарата для диагностики клебсиеллезной инфекции // Вестник ветеринарии. 2011. № 4 (59). С. 90–92. [Lyashenko E.A., Zolotukhin S.N., Vasilyev D.A. Development and application of the bacteriophage for klebsiellos diagnosis. Vestnik veterinarii = Herald of Veterinary Medicine, 2011, no. 4 (59), pp. 90–92. (In Russ.)]