Preview

Инфекция и иммунитет

Расширенный поиск

ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ ПЕСТИНА ПП И ИЗУЧЕНИЕ ЕГО СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ IN VITRO

https://doi.org/10.15789/2220-7619-2018-1-85-90

Полный текст:

Аннотация

Формирование иммунитета против инфекционных заболеваний сопровождается иммуноаллергической перестройкой организма, при этом интенсивность аллергической реакции ассоциирована с наличием специфического иммунитета. Для определения интенсивности сенсибилизации организма часто применяют накожное аллерготестирование. При определении иммунитета у вакцинированных против чумы ранее в качестве аллергена предлагался пестин ПП — полипептидно-полисахаридный комплекс чумного микроба. Авторами оптимизирована методика получения препарата пестина с сохранением его химического состава, высокой специфичности и аллергенной активности. Известно, что недостатком аллергопроб in vivo является высокий риск формирования побочных реакций. Предложен метод оценки адаптивного противочумного иммунитета с аллергеном пестином в антигенспецифических клеточных тестах in vitro. Получение аллергена по модифицированной методике осуществляли путем гидролиза биомассы вакцинного штамма чумного микроба Yersinia pestis EV линии НИИЭГ с последующим фильтрованием и лиофилизацией осадка. В полученном препарате определяли рН и концентрацию белка. Для проверки специфичности образцы подвергали спектрофотометрическому и хроматографическому анализу. Для оценки специфической активности использовали образцы крови 17 человек, иммунизированных вакциной чумной живой из штамма Yersinia pestis EV линии НИИЭГ по эпидемическим показаниям. В качестве сравнительного контроля использовали стерильный изотонический раствор натрия хлорида. Контингент обследовали до вакцинации, на 7, 21 сутки и через 3 месяца после иммунизации путем оценки интенсивности экспрессии базофилами CD63. Биохимический анализ полученного по модифицированной методике пестина и производных позволил судить о качественном составе, показать отсутствие примесей белковой природы, а так же определить углеводный профиль. Использование препарата в качестве аллергена для оценки формирования противочумного иммунитета у вакцинированного контингента подтвердило его специфичность. Полученные данные показали возможность и перспективу использования пестина ПП в качестве тест-аллергена для постановки реакции активации базофилов in vitro.

Об авторах

С. Е. Гостищева
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Россия

Гостищева Светлана Евгеньевна - научный сотрудник научно-производственной лаборатории чумных вакцин.

355035, Ставрополь, ул. Советская, 13–15, тел./факс: +7 (8652) 26-20-50 (служебн.)



Н. В. Абзаева
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Россия

Кандидат биологических наук, заведующая научно-производственной лабораторией чумных вакцин



Д. А. Ковалев
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Россия

Кандидат химических наук, заведующий лабораторией биохимии



Д. Г. Пономаренко
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Россия

Кандидат биологических наук, зав. лабораторией бруцеллеза



Ю. В. Сирица
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Россия

Младший научный сотрудник лаборатории биохимии



Е. Л. Ракитина
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Россия

Кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник сектора иммунологии и патоморфологии особо опасных инфекционных заболеваний лаборатории бруцеллеза



Е. Н. Афанасьев
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Россия

Доктор медицинских наук, главный научный сотрудник научнопроизводственной лаборатории препаратов для диагностики особо опасных инфекций



М. В. Костюченко
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Россия

Научный сотрудник сектора иммунологии и патоморфологии особо опасных инфекционных заболеваний лаборатории бруцеллеза



Список литературы

1. Бахрах Е.Э., Тараненко Т.М. Изучение химического состава аллергена пестина ПП. Очистка пестина фильтрацией через гель сефадекса // Проблемы особо опасных инфекций. 1968. № 2 С. 146–153.

2. Белобородов Р.А., Тараненко Т.М., Бахрах Е.Э., Муравьева Н.К., Дудкова В.К. Эффективность компонентов пестина ПП при определении корреляции аллергической реактивности и приобретенной резистентности к чуме // Проблемы особо опасных инфекций. 1974. № 6 (40). С. 51–54.

3. Коробкова Е.И. Живая противочумная вакцина. М.: Медгиз, 1956. 205 с.

4. Кравцов А.Л., Шмелькова Т.П., Щуковская Т.Н. Влияние противочумной вакцинации на функциональную активность клеток врожденного иммунитета человека // Проблемы особо опасных инфекций. 2011. № 107. С. 77–80.

5. Медуницин Н.В. Вакцинология. М.: Триада-Х, 2010. 507 с. [Medunitsin N.V. Vaktsinologiya [Vaccination]. Moscow: Triada-X, 2010. 507 p.]

6. Патент 2574207 Российская Федерация, МПК G01N33/48. Способ дифференциации поствакцинного и инфекционного бруцеллезного процессов по степени повышенной чувствительности организма к бруцеллам в условиях in vitro / Пономаренко Д.Г., Ракитина Е.Л., Логвиненко О.В., Саркисян Н.С., Костюченко М.В., Куличенко А.Н., Лямкин Г.И., Голубь О.Г., Бердникова Т.В. Заявитель и патентообладатель: ФКУЗ Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; опубл. 10.02.2016.

7. Тараненко Т.М. Изучение химического состава аллергена пестина ПП. Исследование пестина методом электрофореза // Проблемы особо опасных инфекций. 1968. № 2. С. 154–157.

8. Alpenfels W.F. A rapid and sensitive method for the determination of monosaccharides as their dansyl hydrazones by high-performance liquid chromatography. Anal. Biochem., 1981, vol. 114, no. 1, pp. 153–157. doi: 10.1016/0003-2697(81)90466-8

9. Avigad G. Dansyl hydrazine as a fluorimetric reagent for thin-layer chromatographic analysis of reducing sugars. J. Chromatogr. A, 1977, vol. 139, no. 2, pp. 343–347. doi: 10.1016/S0021-9673(00)89330-9

10. Yuan X., Zeng Y., Nie K., Luo D., Wang Z. Extraction optimization, characterization and bioactivities of a major polysaccharide from Sargassum thunbergii. PloS ONE, 2015, vol. 10, no. 12:e0144773. doi: 10.1371/journal.pone.0144773


Для цитирования:


Гостищева С.Е., Абзаева Н.В., Ковалев Д.А., Пономаренко Д.Г., Сирица Ю.В., Ракитина Е.Л., Афанасьев Е.Н., Костюченко М.В. ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ ПЕСТИНА ПП И ИЗУЧЕНИЕ ЕГО СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ IN VITRO. Инфекция и иммунитет. 2018;8(1):85-90. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2018-1-85-90

For citation:


Gostischeva S.E., Abzaeva N.V., Kovalev D.A., Ponomarenko D.G., Siritsa Y.V., Rakitina E.L., Afanasyev E.N., Kostuchenko M.V. OPTIMIZATION OF THE METHOD OF OBTAINING PESTINE PP AND STUDYING ITS SPECIFIC ACTIVITY IN VITRO. Russian Journal of Infection and Immunity. 2018;8(1):85-90. (In Russ.) https://doi.org/10.15789/2220-7619-2018-1-85-90

Просмотров: 138


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2220-7619 (Print)
ISSN 2313-7398 (Online)