Preview

Инфекция и иммунитет

Расширенный поиск

Гексон как основной белок для получения моноклональных антител, выявляющих аденовирусы различных типов

https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-1-47-56

Полный текст:

Аннотация

Инфекционные  заболевания вирусной этиологии являются одной из важнейших проблем здравоохранения. В России ежегодно регистрируется около 50 млн случаев инфекционных заболеваний, до 90% из которых приходится на долю острых респираторных вирусных инфекций. В неэпидемические по гриппу сезоны в качестве основных возбудителей ОРВИ выступают аденовирусы, респираторно-синцитиальный  вирус, вирусы парагриппа и др. Инфекционные  заболевания, вызванные аденовирусами, характеризуется полиморфизмом проявлений, что делает их интересными для изучения и в то же время сложными для клинической диагностики. Применение быстрых, чувствительных и специфичных тестов является актуальным для рутинной клинической лабораторной практики. Для дифференциальной диагностики аденовирусных инфекций в России широко применяются иммуноферментный и иммунофлуоресцентный анализ с применением поликлональных специфичных сывороток, характер и спектр реагирования которых зависит от особенностей иммунного ответа животного-продуцента и состава вырабатываемых антител. Включение в состав современных иммунологических тестов моноклональных антител, направленных к определенным антигенным детерминантам в составе вируса, определяет высокую чувствительность, специфичность и необходимый уровень стандартизации препаратов. Гексон аденовирусов содержит родоспецифические антигены и обладает достаточно консервативной аминокислотной последовательностью среди аденовирусов разных типов. Кроме того, этот белок синтезируется в инфицированных клетках в больших количествах и может быть получен в нативной форме, что определило его использование в качестве иммуногена для получения моноклональных антител, способных выявлять аденовирусы различных типов. Получена панель моноклональных антител к гексону аденовируса. Изучены их биологические и диагностические свойства. По результатам вестерн блоттинга можно заключить, что все моноклональные антитела связываются с олигомерами гексона в составе аденовируса. Специфическая активность новых моноклональных антител в отношении аденовирусов разных типов исследована методами иммуноферментного и непрямого иммунофлуоресцентного анализа. Наибольшей специфической активностью в иммуноферментном анализе обладают моноклональные антитела 4B7 и 6B12, титр антител составил 10–6. Наибольшей активностью в отношении различных типов аденовирусов в непрямом иммунофлуоресцентном анализе обладали моноклональные антитела 6В12, при использовании которых в инфицированных аденовирусами 3, 4, 6 и 19 типов клетках наблюдалась яркая гранулярная флуоресценция преимущественно ядерной локализации. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности использования новых моноклональных антител 4B7 и 6В12 для конструирования современных диагностических тест-систем.

Об авторах

Т. А. Тимошичева
ФГБУ НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России
Россия

Тимошичева Татьяна Александровна - младший научный сотрудник лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева МЗ РФ.

197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17.

Тел.: 8 (812) 499-15-84.



Я. А. Забродская
ФГБУ НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России; НИЦ «Курчатовский институт» — ПИЯФ
Россия

Забродская Яна Александровна - научный сотрудник лаборатории системной вирусологии ФГБУ НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева МЗ РФ; младший научный сотрудник лаборатории биофизики макромолекул НИЦ «Курчатовский институт» — ПИЯФ.

197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17.



И. В. Амосова
ФГБУ НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России
Россия

Амосова Ирина Викторовна - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева МЗ РФ.

197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17.



Список литературы

1. Амосова И.В., Тимошичева Т.А., Егорова А.А., Мусаева Т.Д., Писарева М.М., Едер В.А., Львов Н.И. Генетическое разнообразие аденовирусов, циркулирующих среди военнослужащих Северо-Западного региона // Вопросы вирусологии. 2017. Т. 6, № 62. С. 283–287.

2. Амосова И.В., Тимошичева Т.А., Сверлова М.В., Бузицкая Ж.В., Егорова А.А., Львов Н.И. Использование микрокультурального иммуноферментного анализа и модифицированного метода иммунофлуоресценции для диагностики аденовирусной инфекции // К линическая лабораторная диагностика. 2017. Т. 62, № 4. С. 230–235.

3. Горностаева Ю.А., Романова Т.С. Актуальные вопросы профилактики респираторных инфекций // Медицинский совет. 2012. № 7. С. 98-103.

4. Яцышина С.Б., Агеева М.Р., Воробьева Н.С., Валдохина А.В., Елькина М.А., Горелов А.В., Малеев В.В., Покровский В.И. А деновирусы в этиологической структуре острых респираторных вирусных инфекций в Москве в 2004–2014 гг. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2015. № 5. С. 50–57.

5. Candiano G., Bruschi M., Musante L., Santucci L., Ghiggeri G.M., Carnemolla B., Orecchia P., Zardi L., Righetti P.G. Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis. Electrophoresis, 2004, vol. 25, no. 9, pp. 1327–1333. doi: 10.1002/elps.200305844

6. Chan C.E., Lim A.P., MacAry P.A., Hanson B.J. The role of phage display in therapeutic antibody discovery. Int. Immunol., 2014, vol. 26, no. 12, pp. 649–657. doi: 10.1093/intimm/dxu082

7. Döhner L, Dieckmann U. Antigenic composition of adenovirus hexons. Acta Biol. Med. Ger., 1978, vol. 37, no. 11–12, pp. 1735–1740.

8. Ebner K., Pinsker W., Lion T. Comparative sequence analysis of the hexon gene in the entire spectrum of human adenovirus serotypes: phylogenetic, taxonomic, and clinical implications. J. Virol., 2005, vol. 79, no. 20, pp. 12635–12642. doi: 10.1128/JVI.79.20.12635-12642.2005

9. Fortsas E., Petric M., Brown M. Electrophoretic migration of adenovirus hexon under non-denaturing conditions. Virus Res., 1994, vol. 31, no. 1, pp. 57–65. doi: 10.1016/0168-1702(94)90071-X

10. Irmen K.E., Kelleher J.J. Use of monoclonal antibodies for rapid diagnosis of respiratory viruses in a community hospital. Clin. Diagn. Lab. Immunol., 2000, vol. 7, no. 3, pp. 396–403. doi: 10.1128/CDLI.7.3.396-403.2000

11. Khilko S.N., Kirasova M.A., Kiseleva E.K., Tikchonenko T.I. Comparison of adenoviral hexon polypeptides (monomers) and of native hexons (trimers) by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Acta Microbiol. Hung., 1990, vol. 37, no. 2, pp. 233–245.

12. Köhler G, Milstein C. Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion. Eur. J. Immunol., 1976, vol. 6, no. 7, pp. 511-519. doi: 10.1002/eji.1830060713

13. Laemmli U.K., Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 1970, vol. 227, no. 5259, pp. 680 –685. doi: 10.1038/227680a0

14. Magalhaes L.G., Ferreira L.L.G., Andricopulo A.D. Recent advances and perspectives in cancer drug design. An. Acad. Bras. Cienc., 2018, vol. 90, no. 1, suppl. 2, pp. 1233–1250. doi: 10.1590/0001-3765201820170823

15. Målen H., Berven F.S., Fladmark K.E., Wiker H.G. Comprehensive analysis of exported proteins from Mycobacterium tuberculosis H37Rv. Proteomics, 2007, vol. 7, no. 10, pp. 1702–1718. doi: 10.1002/pmic.200600853

16. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation. J. Histochem. Cytochem., 1974, vol. 22, no. 12, pp. 1084–1091. doi: 10.1177/22.12.1084

17. Orvell C. Structural polypeptides of mumps virus. J. Gen. Virol., 1978, vol. 41, no. 3, pp. 527–539. doi: 10.1099/0022-1317-41-3-527

18. Pollack S.J., Jacobs J.W., Schultz P.G. Selective chemical catalysis by an antibody. Science, 1986, vol. 234, no. 4783, pp. 1570 –1573. doi: 10.1126/science.3787262

19. Walter J.M., Wunderink R.G. Severe respiratory viral infections: new evidence and changing paradigms. Inf. Dis. Clin. North Am., 2017, vol. 31, no. 3, pp. 455–474. doi: 10.1016/j.idc.2017.05.004

20. Zdanov K.V., Lvov N.I., Maltsev O.V. Peredelsky E.V., Pisareva M.M. Main aetiological features of acute respiratory viral diseases in young people of draft age and conscripts during the 2013–2014 epidemic season. Int. Rev. Arm. Forc. Med. Serv., 2016, vol. 89, no. 2, pp. 58–63.


Дополнительные файлы

1. Метаданные
Тема
Тип Чистый текст
Скачать (16KB)    
Метаданные
2. Титульный лист
Тема
Тип Прочее
Скачать (15KB)    
Метаданные
3. Резюме
Тема
Тип Прочее
Скачать (17KB)    
Метаданные
4. Подписи авторов
Тема
Тип Прочее
Скачать (361KB)    
Метаданные
5. Литература
Тема
Тип Прочее
Скачать (73KB)    
Метаданные
6. Названия рисунков и подписи
Тема
Тип Прочее
Скачать (38KB)    
Метаданные
7. Таблица 1
Тема
Тип Чистый текст
Скачать (35KB)    
Метаданные
8. Таблица 2
Тема
Тип Результаты исследования
Скачать (40KB)    
Метаданные
9. Таблица 3
Тема
Тип Результаты исследования
Скачать (30KB)    
Метаданные
10. Рисунок_2_Результаты ЭФ в ПААГ
Тема
Тип Результаты исследования
Скачать (607KB)    
Метаданные
11. Рисунок_1_Очищенный гексон АВ 6 типа в кристаллическом виде
Тема
Тип Результаты исследования
Скачать (862KB)    
Метаданные
12. Рисунок_3_Фрагмент характерного MALDI масс-спектра
Тема
Тип Результаты исследования
Скачать (116KB)    
Метаданные
13. Рисунок_4_Результаты изучения связывания полученных МКА
Тема
Тип Результаты исследования
Скачать (1MB)    
Метаданные
14. Рисунок_5_Активность выделенных из асцитной жидкости МКА
Тема
Тип Результаты исследования
Скачать (55KB)    
Метаданные
15. Данные_Рисунок_5_Активность выделенных из асцитной жидкости МКА
Тема
Тип Данные
Скачать (28KB)    
Метаданные
16. Рисунок_ 6_Характер специфической флуоресценции
Тема
Тип Результаты исследования
Скачать (49KB)    
Метаданные

Для цитирования:


Тимошичева Т.А., Забродская Я.А., Амосова И.В. Гексон как основной белок для получения моноклональных антител, выявляющих аденовирусы различных типов. Инфекция и иммунитет. 2019;9(1):47-56. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-1-47-56

For citation:


Timoshicheva T.A., Zabrodskaya Y.A., Amosova I.V. Hexon-based scaffold for generation of diagnostic monoclonal antibodies against diverse adenovirus types. Russian Journal of Infection and Immunity. 2019;9(1):47-56. (In Russ.) https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-1-47-56

Просмотров: 107


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2220-7619 (Print)
ISSN 2313-7398 (Online)