Отечественный агар Мюллера-Хинтон: соответствие современным требованиям

Растущая устойчивость возбудителей инфекционных болезней к антимикробным препаратам (АМП) в настоящее время требует точных результатов тестирования чувствительности возбудителей инфекций к антимикробным препаратам, поскольку ошибки тестирования могут привести к неправильному выбору препаратов для лечения и способствуют распространению резистентности. Наиболее распространенным методом для определения чувствительности патогенов к АМП является диско-диффузионный метод. Критическим фактором, влияющим на результаты тестирования, является качество используемой питательной среды. Ситуация, сложившаяся в нашей стране с наличием двух документов – методических указаний и клинических рекомендаций, регламентирующих методологию определения чувствительности микроорганизмов к АМП, позволила обращаться на отечественном рынке нескольким питательным средам данного назначения – агару Мюллера-Хинтон, среде АГВ и др., не всегда надлежащего качества. С целью гармонизации методологии определения чувствительности к АМП с международными требованиями в ФБУН ГНЦПМБ разработана технология и организовано производство отечественного агара Мюллера-Хинтон, удовлетворяющего современным требованиям документов EUCAST, клинических рекомендаций и ISO/TS 16782:2016. Основной задачей данной работы явилась сравнительная оценка его качества и пяти аналогичных сред иностранных фирм-производителей при исследовании 11 тест-штаммов диско-диффузионным методом. В результате проведенных исследований отмечена нестандартность некоторых их анализированных питательных сред, представленных на рынке РФ: не все исследуемые питательные среды удовлетворяют требованиям нормативных документов EUCAST и клинических рекомендаций, поскольку значения диаметров подавления роста, рекомендуемые EUCAST для контроля качества, не укладываются в допустимые диапазоны. Ошибки обнаружены при определении чувствительности P. aeruginosa ATCC 27853 к аминогликозидам, фторхинолонам, меропенему, а также при тестировании S. aureus АТСС 25923 и E. faecalis ATCC 29212 и тигециклина. Результаты испытаний проанализированы с позиций нового документа ISO/TS 16782:2016 «Clinical laboratory testing — Criteria for acceptable lots of dehydrated Mueller-Hinton agar and broth for antimicrobial susceptibility testing», пока еще не принятого в нашей стране. Для выяснения возможных причин отклонений результатов от нормативных значений определены концентрации двухвалентных металлов во всех исследуемых питательных сред методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой. В статье показаны новые закономерности, влияющие на достоверность получаемых результатов тестирования антибиотикочувствительности микроорганизмов. Показана необходимость проведения внутрилабораторного контроля качества питательных сред.

питательные среды, агар Мюллера-Хинтон, чувствительность, резистентность, антимикробные препараты, диско-диффузионный метод,

1. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: Методические указания (МУК 4.12.1890-04). М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. 91 с.

2. Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Клинические рекомендации. 206 с. Версия 2018-03. URL: http://www.antibiotic.ru/minzdrav/files/docs/clrec-dsma2018.pdf (22.05.2019)

3. Решедько Г.К., Cтецюк О.У. Особенности определения чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом //Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2001. № 4. С. 348–354.

4. Шепелин А.П., Морозова Т.П., Косилова И.С., Глазкова Г.П., Домотенко Л.В. Оценка качества питательных сред для определения чувствительности к антибактериальным препаратам //Дезинфекция. Антисептика. 2013. № 1. С. 43–48.

5. Andrews J., Walker R., King A. Evaluation of media available for testing the susceptibility of Pseudomonas aeruginosa by BSAC methodology. J. Antimicrob. Chemother., 2002, vol. 50, no. 4, pp. 479–486.

6. Cooke P., Heritage J., Kerr K., Hawkey P.M. Kenneth E. Different effects of zinc ions on in vitro susceptibilities of Stenotrophomonas maltophilia to Imipenem and Meropenem. Antimicrob. Agents Chemother., 1996, vol. 40, no. 12, pp. 2909–2910.

7. Daly J.S., Dodge R.A., Glew R.H., Soja D.T., Deluca B.A., Hebert S. Effect of zinc concentration in Mueller-Hinton agar on susceptibility of Pseudomonas aeruginosa to Imipenem. J. Clin. Microbiol., 1997, vol. 35, no. 4, pp. 1027–1029.

8. Fernandez-Mazarrasa C., Mazarrasa O., Calvo J., del Arco A., Martínez-Martínez L.J. High concentrations of manganese in Mueller-Hinton agar increase MICs of tigecycline determined by Etest. J. Clin. Microbiol., 2009, vol. 47, no. 3, pp. 827–829.

9. Girardello P.J., Bispo M., Yamanaka T.M., Galesa A.C. Cation concentration variability of four distinct Mueller-Hinton agar brands influences polymyxin B susceptibility results. J. Clin. Microbiol., 2012, vol. 50, no. 7, pp. 2414–2418.

10. Matuschek E., Brown D.F.J., Kahlmeter G. Development of the EUCAST disk diffusion antimicrobial susceptibility testing method and its implementation in routine microbiology laboratories. Clin. Microbiol. Infect., 2014, vol. 20, no. 4, pp. 255–266.

11. Mueller J.H., Hinton J. A protein-free medium for isolation of Gonococcus and Meningococcus. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1941, vol. 48, no. 1, pp. 330–333.

12. Thamlikitkul V., Tiengrim S. Effect of different Mueller–Hinton agars on tigecycline disc diffusion susceptibility for Acinetobacter spp. J. Antimicrob. Chemother., 2008, vol. 62, no. 4, pp. 847–848.

13. Veenemans J., Mouton J.W., Kluytmans J.A.J.W., Donnely R., Verhulst C., van Keulen P.H.J. Effect of manganese in test media on in vitro susceptibility of Enterobacteriaceae and Acinetobacter baumannii to tigecycline. J. Clin. Microbiol., 2012, vol. 50, no. 9, pp. 3077–3079.