Preview

Инфекция и иммунитет

Расширенный поиск

ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ ПРИ АНАЛИЗЕ ВИРУСНЕЙТРАЛИЗУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ АНТИРАБИЧЕСКИХ СЫВОРОТОК И ИММУНОГЛОБУЛИНА

Аннотация

В настоящем исследовании рассматривается разработка метода определения уровня антирабических антител в иммунных сыворотках и препарате иммуноглобулина с использованием проточной цитометрии. Метод основан на измерении уровня флуоресценции в клетках Vero, инкубированных в питательной среде с добавлением смеси разведений антирабических сывороток или препарата иммуноглобулина и аттенуированного штамма вируса бешенства «Москва 3253», адаптированного к репродукции на перевиваемых клеточных линиях.

Для определения уровня антител образцы антирабических сывороток и иммуноглобулина следует разводить в солевом растворе соответственно в 20 и 200 раз. При этом рекомендуемая доза вируса должна составлять 0,1 ИД50 на 1 клетку. Для фиксации и пермебеализации клеточной мембраны применяли реагент Cytoperm/Cytofix (BD Pharmingen, США), содержащий формальдегид. Этот компонент способен инактивировать вирус бешенства, что позволяет считать предлагаемый метод соответствующим принципам биологической безопасности. Для окрашивания предлагается использовать конъюгат антирабического иммуноглобулина с ФИТЦ (ФГБУ ВНИИЗЖ, Россия). Данное обстоятельство не ограничивает примененние аналогичных препаратов, предназначенных для этой цели. Цитометрические исследования осуществляли на проточном цитометре, снаряженным аргоновым лазером мощностью 20 мВт, при длине волны эмиссии 488 нм со скоростью 500 клеток в секунду. Инфицированными считали те клетки, значения интенсивности флуоресценции которых составили более 10 условных единиц.

Использование проточной цитометрии позволяет определить точное количество инфицированных клеток в исследуемой суспензии, а также степень их инфицирования по интенсивности флуоресценции. Уровень содержания антител в исследуемых образцах учитывают по калибровочному графику, построенному на основании данных исследования стандартного образца активности антирабического иммуноглобулина, имеющего активность 30 МЕ в 1 мл (NIBSC, Поттерс Бар, Великобритания).

Установлена высокая степень корреляции результатов, полученных с помощью предлагаемого метода в сравнении с результатами, полученных и других методов определения активности антирабических препаратов – биологической реакции нейтрализации вируса на белых мышах (0,92) и модифицированного метода FAVN (0,98). При этом сравнение результатов анализа уровня антирабических антител, полученных с применением проточной цитометрии, и результатов, полученными в тестах in vivo, проведено впервые.

Возможность быстрого получения результата, а также точного определения степени инфицирования клеток по интенсивности флуоресценции позволит использовать предлагаемый метод на этапах контроля в производстве разрабатываемых и выпускаемых иммунобиологических антирабических препаратов.

 

Об авторах

Сергей Вячеславович Генералов
ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора, Саратов
Россия

ведущий научный сотрудник, кандидат биологических наук

SPIN-код: 4130-2475




А Л Кравцов
ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора, Саратов
Россия
доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник


В А Кожевников
ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора, Саратов
Россия
младший научный сотрудник


Ю К Гаврилова
ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора, Саратов
Россия
научный сотрудник


Е Г Абрамова
ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора, Саратов
Россия
доктор биологических наук, главный научный сотрудник


А К Никифоров
ФКУЗ РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора, Саратов
Россия
доктор биологических наук, заместитель директора


Дополнительные файлы

1. Метаданные
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (16KB)    
Метаданные
2. Подписи
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (632KB)    
Метаданные
3. Титульный лист
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (17KB)    
Метаданные
4. Резюме
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (15KB)    
Метаданные
5. рисунок 1
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (11KB)    
Метаданные
6. рисунок 2
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (3MB)    
Метаданные
7. рисунок 3
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (11KB)    
Метаданные
8. Подписи к рисункам
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (15KB)    
Метаданные
9. Таблица
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (16KB)    
Метаданные
10. Литература
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (25KB)    
Метаданные
11. Направительное письмо
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (535KB)    
Метаданные
12. Экспертное заключение
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (793KB)    
Метаданные
13. Статья без рисунков и таблицы
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (48KB)    
Метаданные
14. Статья с исправленими
Тема
Тип Прочее
Скачать (395KB)    
Метаданные
15. Статья с исправлениями без рисунков
Тема
Тип Прочее
Скачать (54KB)    
Метаданные
16. Резюме с исправленими
Тема
Тип Прочее
Скачать (18KB)    
Метаданные
17. Список литературы с исправлениями
Тема
Тип Прочее
Скачать (26KB)    
Метаданные

Для цитирования:


Генералов С.В., Кравцов А.Л., Кожевников В.А., Гаврилова Ю.К., Абрамова Е.Г., Никифоров А.К. ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ ПРИ АНАЛИЗЕ ВИРУСНЕЙТРАЛИЗУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ АНТИРАБИЧЕСКИХ СЫВОРОТОК И ИММУНОГЛОБУЛИНА. Инфекция и иммунитет. 2019;.

For citation:


Generalov S.V., Kravtsov A.L., Kozhevnikov V.A., Gavrilova Y.K., Abramova E.G., Nikiforov A.K. Anti-rabies serum and immunoglobulin virus-neutralizing activity assessed by flow cytometry. Russian Journal of Infection and Immunity. 2019;.

Просмотров: 9


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2220-7619 (Print)
ISSN 2313-7398 (Online)