Preview

Инфекция и иммунитет

Расширенный поиск
Online First
https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-0

ОБЗОРЫ

29
Аннотация

За последние два - три десятилетия благодаря использованию новых технологий было значительно расширено представление о спектре функциональных возможностей нейтрофильных гранулоцитов. Детально изучен их эффекторный потенциал в отношении инфекционных агентов, включающий фагоцитоз, продукцию активных форм кислорода и азота, дегрануляцию с высвобождением многочисленных ферментов и антимикробных пептидов, образование внеклеточных ловушек. При этом установлено, что многие их тех факторов, которые нейтрофилы используют для прямого уничтожения патогенов, оказывают регулирующее влияние в отношении других клеток иммунной системы и самих нейтрофилов. Кроме того, при активации нейтрофилы способны синтезировать ряд биологически активных молекул de novo. Реализация иммунорегуляторного влияния нейтрофилов в отношении макрофагов, дендритных клеток, Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов может происходить как путём прямого межклеточного контакта, так и опосредовано через продукцию цитокинов и других биологически активных медиаторов. Амбивалентное, как хелперное, так и супрессорное, воздействие нейтрофилов на клетки иммунной системы свидетельствует об их важной роли как в условиях гомеостаза, так и при различных видах патологии, в частности при развитии злокачественных опухолей. Способность нейтрофильных гранулоцитов проявлять разнообразные, порой даже антагонистические варианты воздействия на иммунные клетки и клетки других тканей, свидетельствует об их функциональной пластичности и, вероятно, гетерогенности. При этом вектор активности, проявляемой нейтрофилами, во многом зависит от того микроокружения, в котором они оказываются, выходя из периферического кровотока. Традиционно считаясь индукторами воспалительной реакции, нейтрофилы демонстрируют способность параллельно включать механизмы, способствующие ограничению и разрешению воспаления. Благодаря интравитальной микроскопии в моделях на животных установлена способность нейтрофилов возвращаться в кровоток после выхода во внесосудистое пространство, что бросает вызов классической концепции однонаправленности миграции нейтрофилов из сосудистого русла в ткани. Также получены доказательства, что в определённых условиях нейтрофилы могут проявлять себя как антиген-презентирующие клетки по отношению к Т-лимфоцитам и рекрутироваться из сайтов воспаления в дренирующие лимфатические узлы. И хотя многие данные получены в условиях in vitro или в моделях на животных и поэтому требуют дополнительного изучения и подтверждения, однозначно можно констатировать, что влияние нейтрофилов не ограничивается рамками системы врожденного иммунитета.

2
Аннотация

Трефоиловые факторы представляют собой пептиды, содержащие структурный домен в виде листа клевера. Они синтезируются во многих органах - в различных отделах человеческого мозга (предполагается участие трефоиловых факторов в развитии и дифференциации нервной системы), в щитовидной железе, молочной железе, матке, предстательной железе, в конъюнктиве, в дыхательной системе, в слюнных железах, желчном пузыре, но в наибольшем количестве обнаруживаются на слизистой желудочно-кишечного тракта: TFF-1 в желудке, TFF-2 в желудке и в двенадцатиперстной кишке, TFF-3 в кишечнике. Всё большее число исследований говорит не только о широкой представленности трефоиловых пептидов в организме, но также и об их важных регуляторных функциях. Трефоиловые факторы влияют на клеточную адгезию, усиливая способность к миграции эпителиальных клеток. Восстановление обратимо поврежденных структур эпителия – реституция – облегчается также за счет антиапоптотического действия трефоиловых пептидов (аноикис-резистентность). Проангиогенные свойства трефоиловых пептидов значительно выражены и могут способствовать ангиогенезу опухолей.  Иммуномодулирующие свойства трефоиловых факторов заключаются во влиянии на экспрессию провоспалительных и защитных факторов (в том числе оксида азота, цитокинов, дефензинов). Взаимодействие трефоиловых факторов и муцина повышает вязкость слизи, что играет роль в защите слизистой оболочки против ульцерогенных агентов. В то же время повышение вязкости слизи в присутствии TFF-2 может быть фактором, ухудшающим течение бронхиальной астмы. Уровень экспрессии трефоиловых факторов связан с патогенезом воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта. Показано, что направленность изменений в уровне трефоиловых факторов может отличаться в зависимости от локализации и глубины поражения. Изменение экспрессии трефоиловых факторов играет важную роль в онкогенезе. Рак желудка и колоректальный рак сопровождается повышением экспрессии TFF-1. Содержание трефоиловых факторов связано со стадией развития опухоли, и привлекает внимание исследователей как диагностический показатель, характеризующий стадию, наличие метастазов  и чувствительность к химиотерапии при гастроинтестинальном раке. Активно изучается роль трефоиловых факторов и при других злокачественных новообразованиях, в том числе при ретинобластоме, карциноме груди, карциноме щитовидной железы. Расширяющийся объем экспериментальных и клинических данных свидетельствует о том, что трефоиловые факторы могут рассматриваться как перспективные маркеры желудочно-кишечных и онкологических заболеваний.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

43
Аннотация

Введение. Ротавирусы группы А (РВА) с генотипом G9P[8] являются распространенной причиной острого гастроэнтерита среди детей в России. На территории Нижнего Новгорода доля этого генотипа в типовой структуре ротавируса в сезон 2016-17 гг. достигла 63,1 %. В мире для специфической профилактики ротавирусной инфекции широко применяют две вакцины (RotaTeq и Rotarix). Кроме этого, на базе штамма G9P[8] разработана индийская вакцина Rotavac, которая применяется на региональном уровне. Поскольку штаммы ротавируса, входящие в состав вакцин были изолированы более 30 лет назад, представляет научно-практический интерес проведение филогенетического анализа и сравнительного анализа антигенных эпитопов российских и вакцинных штаммов. В настоящем исследовании впервые проведен сравнительный анализ аминокислотного состава В- и Т-клеточных эпитопов белка VP7 ротавируса с генотипом G9 нижегородских и вакцинных штаммов RotaTeq, Rotarix и Rotavac.

Материалы и методы. Материалом для исследования служили нуклеотидные и аминокислотные последовательности гена VP7 РВА с генотипом G9. Ротавирусы были выявлены у детей, госпитализированных с острым гастроэнтеритом в инфекционный стационар Нижнего Новгорода в период 2011-2016 гг.

Результаты. Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей гена VP7 показал, что нижегородские штаммы принадлежат аллели G9-III. На основе выведенных аминокислотных последовательностей VP7 проанализировано три В-клеточных эпитопа (7-1a, 7-1b и 7-2) и два Т-клеточных эпитопа (16-28 а.о. и 40-52 а.о.). Наименьшее количество замен было показано для вакцины RotaTeq (0-3 а.о. на эпитоп), зарегистрированной в России. Аналогично (0-3 а.о. замены на эпитоп), было показано при сравнении нижегородских изолятов РВА с вакцинным штаммом в составе Rotavac. Наибольшее количество аминокислотных различий обнаружено между вакцинным штаммом Rotarix и нижегородскими изолятами РВА (3-10 а.о. на эпитоп).

Заключение. В настоящей работе проведен филогенетический анализ, а также выявлены различия в аминокислотном составе антигенных сайтов белка VP7 РВА, между нижегородскими ротавирусами с генотипом G9 и штаммами в составе вакцин RotaTeq, Rotavac и Rotarix. Накопление мутаций в антигенных эпитопах может способствовать ускользанию вируса от иммунного ответа. В связи с этим, для оценки возможного воздействия вакцин на типовую структуру популяции РВА и контроля за появлением измененных антигенных вариантов необходим постоянный молекулярный мониторинг циркулирующих РВА.
11
Аннотация

Индукция сильного мультиэпитопного Т-клеточного ответа против вируса гепатита С (HCV) играет важную роль в элиминации вируса, тогда как недостаточность   адаптивного ответа способствует хронизации и быстрой прогрессии HCV-инфекции. Поскольку дендритные клетки (ДК) способны примировать наивные Т-лимфоциты и индуцировать эффективный иммунный ответ, использование ДК-вакцин для усиления HCV-специфического  Т-клеточного  ответа рассматривается в качестве нового подхода к лечению хронического гепатита С (ХГС). В работе исследована способность ДК, генерированных из моноцитов в присутствии интерферона-α и нагруженных рекомбинантными HCV белками Сore (1-120) и NS3 (1192-1457), индуцировать антиген-специфический клеточный ответ у здоровых доноров и больных ХГС. Иммунный ответ оценивался по пролиферативной активности и продукции Th1 (IFN-γ)/Th2 (IL-4, IL-6) цитокинов в культурах мононуклеарных клеток (МНК), а также активации цитотоксических Т-лимфоцитов в тесте дегрануляции. Проведенные исследования показали, что первичный антиген-специфический ответ в культурах МНК серонегативных доноров детектировался лучше при стимуляции ДК, нагруженными одновременно двумя антигенами (ДКСore/NS3), чем при нагрузке одним белком. ДКСore/NS3 индуцировали пролиферативный ответ и дегрануляцию СD8+Т-клеток у всех тестируемых доноров и в 50% (5/10) случаев индуцировали продукцию IFN-γ. Аналогично ДК доноров, ДКСore/NS3 пациентов с ХГС индуцировали в большинстве случаев (86%) пролиферативный ответ и в 57% случаев - продукцию IFN-γ. В то же время активация цитоткосических Т-клеток у пациентов выявлялась реже (в 57% vs 100% у доноров), что могло быть отчасти обусловлено повышенной спонтанной дегрануляцией CD8+ Т-клеток у отдельных пациентов. Полученные данные обосновывают возможность использования ДК-вакцин на основе интерферона-α-индуцированных ДК c целью  профилактики и лечения  хронической HCV-инфекции.


6
Аннотация

В работе представлены результаты сравнительного исследования созревания дендритных клеток, выделенных из мононуклеаров периферической крови,  здоровых добровольцев и пациентов с хроническим остеомиелитом. У всех пациентов был выделен Staphylococcus aureus. Для созревания дендритные клетки культивировали при стандартных условиях в ростовой среде (RPMI-1640, антибиотики, L-глутамин, 15%  телячья эмбриональная сыворотка)  в присутствии интерлейкина- 4   и гранулоцитарно-макрофогального колониестимулирующего фактора  с последующим добавлением коктейля стимуляторов, включавшего интерлейкин-1β, фактор некроза опухоли-α, интерлейкин- 6, простогландин Е2. Визуальные характеристики дендритных клеток в процессе созревания определяли с помощью инвертированного микроскопа  Zeiss ODSERVER.Z1 с  программой визуализации изображений AxioVision Rel.4.8,  используя световую и фазовоконтрастную микроскопию при увеличении 40х, 100х, 200х, 400х, 630х. Определение  иммунофенотипа  дендритных клеток проводили  с использованием панели моноклональных антител:    CD 80FITC, CD 86 (B7-2)PE, HLA-DR PC7 (Beckman Coulter, США), CD14PerCP-Cy5.5, CD83APC, CD40PE-Cy7 (Becton-Dickinson, США) с соответствующими изотипическими контролями на цитофлуориметре  FACS Canto II (Becton-Dickinson, США). Показано, что в процессе созревания  дендритные клетки пациентов, так и условно здоровых доноров,  увеличиваются в размерах и приобретают отростчатую  форму.  Экспрессия CD 86, CD 83,  CD 80, CD 40 у пациентов с хроническим остеомиелитом выражена ниже, чем экспрессия соответствующих маркеров у условно здоровых добровольцев. После стимуляции дендритных клеток пациентов с остеомиелитом достоверно увеличивается процент клеток  CD 83+ и клеток,  несущих ко-стимулирующие молекулы CD 86, CD 80, СD 40.   По мере созревания различия,   выявленные при исследовании незрелых клеток здоровых добровольцев и  пациентов с остеомиелитом,  исчезают, и на 10 сутки уровень экспрессии ключевых маркеров оказывается на близких по значениям уровнях.   При этом  экспрессия основного маркера дифференцировки СD83  и ко-стимулирующей молекулы CD 80 у  пациентов с остеомиелитом увеличивается  интенсивнее, чем у здоровых.  Таким образом, способность дендритных клеток, выделенных из моноцитов периферической крови, пациентов с хроническим остеомиелитом, вызванным Staphylococcus aureus, к созреванию под влиянием активаторов  in vitro не нарушена. Полученные результаты открывают возможность использования дендритных клеток  в качестве естественного, замещающего адъювант компонента при разработке вакцин для лечения хронического остеомиелита.

1
Аннотация

Резюме. Гнойно-некротические осложнения у больных с синдромом диабетической стопы являются одной из главных причин ампутаций и инвалидизации, и даже гибели пациентов. Целью данной работы явилось изучение роли MRSA и их молекулярно-генетических особенностей, а также антибиотикорезистентности в развитии гнойно-некротических форм синдрома диабетической стопы пациентов г. Красноярска за период 2010-2016 гг. Исследована в динамике микрофлора гнойно-некротических осложнений у 240 пациентов с синдромом диабетической стопы, ее антибиотикочувствительность, а также молекулярно-генетические особенности метициллинрезистентных Staphylococcus aureus. Для изучения микрофлоры гнойных осложнений использован бактериологический метод. Антибиотикочувствительность определяли диско-диффузионным методом; чувствительность стафилококков к проводили методом скрининга, ПЦР, методом серийных разведений в плотной среде в соответствии с международными рекомендациями СLSI, EUCAST. Для генотипирования и определения  молекулярно-генетических особенностей – ПЦР, М-ПЦР, секвенирование. Обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы WHONET (ВОЗ). Уровень значимости p<0,05. Микрофлора гнойно-некротических форм синдрома диабетической стопы представлена грамотрицательными микроорганизмами - на долю представителей семейства Enterobacteriaceae приходилось 34,4%, неферментирующих грамотрицательных бактерий - 19,1%; грамположительными микроорганизмами – в 46,5% случаев, доля S. aureus - 18,4%. Микроорганизмы характеризовались полирезистентностью к антимикробным препаратам: доля БЛРС-продуцентов - 36,4%; доля МБЛ-продуцентов - 30,3%; доля MRSA - 36,4%. Доминирующим клоном MRSA среди пациентов с гнойно-некротическими формами синдрома диабетической стопы, госпитализированных в правобережный и левобережный стационары г. Красноярска являлся ST239/spa3(t037)/agr1/SCCmecIII.1.1.2(IIIA)/coaIV/tst+; характеризуюшийся высоким уровнем вирулентности и мультирезистентностью. Вторыми по значимости генетическими вариантами MRSA являлись ST8/spa1(t008)/agr1/SCCmecIV.3.1.1/CoaIII и ST12/spanew(t156)/agr1/SCCmecUT/coaIorVII; которые характеризовались устойчивостью к 1-2 группам антимикробных препаратов, помимо β-лактамов. Среди пациентов с гнойно-некротическими формами синдрома диабетической стопы, госпитализированных в стационары г. Красноярска распространены в основном генетические варианты MRSA, соответствующие клонам, выявленным ранее от пациентов с другими нозологиями на данной территории. Установлено, что среди от пациентов с гнойно-некротическими формами синдрома диабетической стопы, госпитализированных как в правобережный так и левобережный стационары г. Красноярска выделяются изоляты MRSA, преимущественно относящиеся к одним и тем же генетическим вариантам. Длительная госпитализация пациентов с данной патологией, а также их последующая неоднократная госпитализация в другие стационары г. Красноярска, способствует переносу госпитальных штаммов из одного стационара в другой.

10
Аннотация

В настоящем исследовании рассматривается разработка метода определения уровня антирабических антител в иммунных сыворотках и препарате иммуноглобулина с использованием проточной цитометрии. Метод основан на измерении уровня флуоресценции в клетках Vero, инкубированных в питательной среде с добавлением смеси разведений антирабических сывороток или препарата иммуноглобулина и аттенуированного штамма вируса бешенства «Москва 3253», адаптированного к репродукции на перевиваемых клеточных линиях.

Для определения уровня антител образцы антирабических сывороток и иммуноглобулина следует разводить в солевом растворе соответственно в 20 и 200 раз. При этом рекомендуемая доза вируса должна составлять 0,1 ИД50 на 1 клетку. Для фиксации и пермебеализации клеточной мембраны применяли реагент Cytoperm/Cytofix (BD Pharmingen, США), содержащий формальдегид. Этот компонент способен инактивировать вирус бешенства, что позволяет считать предлагаемый метод соответствующим принципам биологической безопасности. Для окрашивания предлагается использовать конъюгат антирабического иммуноглобулина с ФИТЦ (ФГБУ ВНИИЗЖ, Россия). Данное обстоятельство не ограничивает примененние аналогичных препаратов, предназначенных для этой цели. Цитометрические исследования осуществляли на проточном цитометре, снаряженным аргоновым лазером мощностью 20 мВт, при длине волны эмиссии 488 нм со скоростью 500 клеток в секунду. Инфицированными считали те клетки, значения интенсивности флуоресценции которых составили более 10 условных единиц.

Использование проточной цитометрии позволяет определить точное количество инфицированных клеток в исследуемой суспензии, а также степень их инфицирования по интенсивности флуоресценции. Уровень содержания антител в исследуемых образцах учитывают по калибровочному графику, построенному на основании данных исследования стандартного образца активности антирабического иммуноглобулина, имеющего активность 30 МЕ в 1 мл (NIBSC, Поттерс Бар, Великобритания).

Установлена высокая степень корреляции результатов, полученных с помощью предлагаемого метода в сравнении с результатами, полученных и других методов определения активности антирабических препаратов – биологической реакции нейтрализации вируса на белых мышах (0,92) и модифицированного метода FAVN (0,98). При этом сравнение результатов анализа уровня антирабических антител, полученных с применением проточной цитометрии, и результатов, полученными в тестах in vivo, проведено впервые.

Возможность быстрого получения результата, а также точного определения степени инфицирования клеток по интенсивности флуоресценции позволит использовать предлагаемый метод на этапах контроля в производстве разрабатываемых и выпускаемых иммунобиологических антирабических препаратов.

 

20
Аннотация

Целью исследования явилось изучение особенностей фенотипа и уровней активности NAD(P)-зависимых дегидрогеназ нейтрофилов крови в прогнозе развития абдоминального сепсиса у больных распространенным гнойным перитонитом (РГП). Обследовано 50 больных РГП внебольничного и госпитального происхождения в дооперационном периоде. С 5 по 10 сутки послеоперационного периода у 35 больных (70,0%) развился абдоминальный сепсис, у 15 больных (30,0%) осложнения отсутствовали. В качестве контроля обследовано 67 здоровых людей. Исследование фенотипа нейтрофильных гранулоцитов крови проводили методом проточной цитометрии с использованием прямой иммунофлуоресценции цельной периферической крови. По средней интенсивности флуоресценции оценивались уровни экспрессии поверхностных рецепторов. Исследование активности NAD(P)-зависимых дегидрогеназ в нейтрофилах крови проведено с помощью биолюминесцентного анализа. Установлено, что воспалительная реакция у больных РГП характеризуется нейтрофилезом и изменением фенотипа нейтрофилов в крови. Маркерами последующего развития сепсиса при РГП являются менее выраженное (по сравнению с показателями больных без осложнений) увеличение количества нейтрофилов, снижение содержания HLA-DR+-клеток на фоне высокого уровня нейтрофилов, экспрессирующих высокоаффинный рецептор для IgG. У пациентов без последующего развития осложнений повышается количество нейтрофилов с экспрессией рецептора CD23. Метаболизм нейтрофилов у больных РГП характеризуется снижением интенсивности пластических процессов за счет низкой активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и дисбалансом активности ферментов митохондриального компартмента. Особенностью метаболизма нейтрофилов у больных РГП без последующего развития сепсиса является высокая активность анаэробной реакции лактатдегидрогеназы и снижение активности NADP-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы. У больных РГП с последующим развитием сепсиса обнаружен высокий уровень NAD-зависимого оттока субстратов с цикла трикарбоновых кислот на реакции аминокислотного обмена через глутаматдегидрогеназу, что может повлиять на активность аэробного дыхания нейтрофилов. Установленные различия фенотипа и активности ферментов в нейтрофилах крови у больных РГП в зависимости от последующего развития сепсиса определяют возможность создания метода прогноза развития осложнений и разработки иммуноактивной терапии в послеоперационном периоде РГП.

1
Аннотация

Поражения слизистой оболочки рта занимают одно из ведущих мест в структуре стоматологических заболеваний. Наиболее актуальным среди дерматозов  слизистой  оболочки рта  и красной каймы губ является красный плоский лишай, который  рассматривают как мультифакторное заболевание. В литературе обсуждаются различные концепции патогенеза красного плоского лишая - это иммуноаллергическая, вирусная, наследственная и мембранодеструктивная. Многие авторы указывают на ведущую роль иммунной теории в развитии заболевания. Несмотря на  свидетельство включения иммунных механизмов, сложности взаимоотношения патологического процесса и нормальных защитных реакций, и возросший интерес к этому заболеванию, многие аспекты иммунологического конфликта при красном плоском лишае остаются неясными. Мало данных о конкретных изменениях в иммунной системе в зависимости от клинической формы заболевания, что определило цель настоящего исследования: определение иммунологического статуса у больных с различными клиническими  формами красного плоского лишая слизистой оболочки рта. Обследована периферическая кровь у 286 пациентов (248 лиц  женского пола и 38 мужского) в возрасте от 27 до 84 лет с красным плоским лишаем слизистой оболочки рта. Все пациенты были разделены на 6 групп в зависимости от клинической формы заболевания. Для оценки иммунологического статуса у больных с различными клиническими  формами красного плоского лишая слизистой оболочки рта: типичной, экссудативно-гиперемической, эрозивно-язвенной, гиперкератотической, атипичной, буллезной  были использованы методы для определения неспецифических механизмов защиты, гуморального и клеточного звеньев иммунитета.Проведенными иммунологическими исследованиями установлен комплекс иммунопатологических реакций, характеризующихся подавлением поглотительной и метаболической активности фагоцитов, дисиммуноглобулинемией, изменениями соотношений основных популяций и субпопуляций иммунокомпетентных клеток. Высокий уровень Т-хелперов – индукторов (CD4+) у больных с типичной, гиперкератотической, экссудативно-гиперемической, атипичной и эрозивно-язвенной формами заболевания характеризуется, как самоподдерживающийся иммунный ответ, обусловленный подавлением элиминации патогенных агентов и, как следствие, приводящий к формированию  аутоиммунного процесса.

При оценке иммунного статуса у больных красным плоским лишаем слизистой оболочки рта  установлена взаимосвязь между проявлениями синдрома «дисфагоцитоза», нарушениями в системе гуморального и клеточного звеньев иммунитета с различными клиническими формами заболевания, что, позволяет сделать заключение о патогенетической роли дисбаланса в системе механизмов, обеспечивающих элиминацию патогенов, в том числе инфекционной природы в развитии заболевания.

18
Аннотация

Резюме. В настоящее время продолжается поиск биомаркеров, свидетельствующих о наличии напряженного противочумного иммунитета. Цель исследования – в динамике формирования противочумного ответа определить показатели клеточного и гуморального иммунитета у лиц, привитых вакциной чумной живой по эпидемическим показаниям, и охарактеризовать корреляционные взаимосвязи между ними. Были исследованы образцы крови от 114 человек, проживающих на территории Прикаспийского песчаного природного очага чумы. С помощью коммерческих наборов определяли спонтанную и стимулированную конканавалином А продукцию цитокинов IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-18, IFN-γ, TNF-α («Вектор-Бест», Россия) IL-17A (eBioscience, Австрия), иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA («Вектор-Бест», Россия) на иммуноферментном анализаторе «LAZURIT» (Dynex Technologies, USA). Иммунофенотипирование лейкоцитов крови проводили с использованием меченых флуорохромами моноклональных антител Cyto-Stat CD45-FITC, CD4-PE, CD8-ECD, CD3-PC5 (Backman Coulter, USA) на проточном цитометре СyAn ADP DakoCytomation (Дания).

Анализ полученных данных установил ряд отличий по продукции определяемых цитокинов (TNF-α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-17) между группами ревакцинированных и впервые вакцинированных людей. Однако, клетки крови людей, независимо от кратности прививки сохраняли свою функциональную реактивность и были способны активно секретировать большинство из анализируемых цитокинов (8 из 10) в ответ на стимуляцию конканавалином А. Установлены диагностически значимые для характеристики специфического противочумного ответа изменения концентрации IFN-γ, TNF-α и IL-4.  Для этих маркерных цитокинов выявлено наибольшее число корреляционных взаимосвязей, как между собой, так и с изменением уровня других показателей: цитокинов, иммуноглобулинов, Т-клеток. Выявленные множественные корреляционные связи между показателями цитокинового и иммунного статусов свидетельствуют об активации как клеточного, так  и гуморального звеньев противочумного иммунного ответа. Показана информативность применения комплексного анализа корреляционных взаимосвязей между показателями гуморального и клеточного иммунитета у лиц, вакцинированных против чумы для оценки у них уровня иммунологической эффективности (фактической привитости) вакцинации.

6
Аннотация

В настоящее время исследователи полагают о многогранной потенции ТТV и HGV в формировании различных острых и хронических процессов (заболеваний печени, дыхательных путей, онкологических, болезней крови, гематологических нарушений и др). Распространению HGV и TTV-инфекций способствует использование инфицированной крови и ее продуктов. Изучение роли HGV и TTV в этиологической структуре поражения печени у детей с острым лимфобластным лейкозом, взаимосвязи данных инфекций с развитием токсического поражения печени на фоне проводимой терапии представляет особый интерес. Целью настоящего исследования явилась оценка внутрибольничного инфицирования вирусами HGV и TTV и их возможного влияния на частоту и тяжесть поражения печени у детей с острым лимфобластным лейкозом. Основанием для проведения исследования на НGV и TTV-инфекции среди больных с острым лимфобластным лейкозом было выявление у детей гепатитов неясной этиологии при исключении вирусных гепатитов В и С. Объектами исследования являлись пациенты гематологического отделения и препараты донорской крови, перелитые в период лечения. Было обследовано 99 пациентов, 286 образцов различных препаратов крови. Использовался комплекс методов: эпидемиологические методы исследования (ретроспективный и оперативный эпидемиологический анализ, метод проспективного наблюдения), микробиологический мониторинг, метод иммуноферментного анализа, метод полимеразной цепной реакции, метод вариационной статистики. За 6-летний период наблюдения выявлен 51 ребенок с впервые установленным диагнозом острый лимфобластный лейкоз с преобладанием детей в возрасте от 2-х до 4-х лет (47,1%). При обследовании в динамике в соответствии с установленными периодами, связанными с этапами специфического лечения, количество детей с острым лимфобластным лейкозом, инфицированных HGV, в процессе лечения неуклонно нарастало с 9,8% (15 день лечения) до  45,1% (на этапе поддерживающей терапии). На фоне лечения в 100% случаев отмечалось инфициро­вание вирусом TTV изначально ДНК TTV-негативных пациентов, при этом у данной категории детей частота выяв­ления TTV-инфекции в динамике достоверно нарастала. Таким образом, в процессе исследования было установлено, что 48% детей с острым лимфобластным лейкозом были инфицированы HGV и 77% детей инфицированы TTV на начальном этапе лечения (период индукции ремиссии), и в это же время больные получали максимальную парентеральную, в том числе гемотрансфузионную терапию. Проведены исследования препаратов донорской крови выявили наличие РНК НGV  в 6,6±1,46%, а  ДНК TTV – в 19,3 ±2,9% случаев.

45
Аннотация

Исследования архивного цитологического материала документированного врачами-цитологами за ряд лет после тонкоигольной аспирационной пункционной биопсии при аутоиммунном тиреоидите и доброкачественных образований щитовидной железы человека (киста и зоб) позволили отметить одновременное присутствие их в долях щитовидной железы в разных сочетаниях, возник вопрос об их возможной этиологической взаимосвязи. Исследованиями цитологического материала при аутоиммунном тиреоидите и доброкачественных образований щитовидной железы человека (киста и зоб), окрашенных изначально в медицинских лабораториях по Романовскому-Гимза, выявлена гемоспоридийная (кровепаразитарная) инфекция. В процессе длительного детального изучения мазков с цитологическим материалом удалось проследить эволюцию развития гемоспоридий в тироцитах щитовидной железы. Для уточнения локализации ДНК тироцитов и гемоспоридийной инфекции после изучения всего массива мазков было решено окрасить (перекрасить) выборочный ряд оригинальных архивных мазков реактивом Шиффа по Фёльгену. Метод окрашивания мазков по Романовскому-Гимза является адсорбционным, что позволило повторно использовать эти же мазки для окраски реактивом Шиффа по Фёльгену, где краситель фуксин после гидролиза ДНК соляной кислотой встраивается в ДНК и окрашивает её в малиново-сиреневый цвет. Окрашивание ДНК по Фёльгену позволило в «медузообразных» структурах из содержимого кист, являющихся, по всей вероятности, экзоэритроцитарной стадией развития гемоспоридий, локализовать находящуюся в них и некоторых эритроцитах паразитарную ДНК. При аутоиммунном тиреоидите локализовать ядерную ДНК тироцитов, и паразитарную ДНК в виде точечных включений и диффузно распределенной в цитоплазме тироцитов, а также ДНК в эритроцитах крови в виде ядер разных размеров, окрашенных в малиново-сиреневый цвет. При узловом зобе удалось локализовать ядерную ДНК тироцитов, и ДНК гемоспоридий в виде точечных включений и диффузно распределенной в цитоплазме тироцитов. ДНК гемоспоридий в эритроцитах крови проявилась в виде ядер разных размеров, окрашенных в малиново-сиреневый цвет, неокрашенная специальным красителем протоплазма кровепаразитарной инфекции выявлялась виде светлой полосы вокруг ядер в эритроцитах. Ядерный материал гемоспоридий в эритроцитах был разных размеров, что может свидетельствовать о разных видах и/или генерациях возбудителя. Внутриклеточное развитие гемоспоридийной инфекции при зобе в тироцитах приводит к выраженной гиперплазии цитоплазмы и её вакуолизации, ядра тироцитов при этом деформируются, вакуолизируются, уменьшаются в размерах и деградируют (c высокой вероятностью мутаций и делеций в ДНК), достигая преднеопластического уровня.

4
Аннотация

Цель исследования. Изучение влияния современных климатических изменений на природный очаг КГЛ на юге Европейской части Российской Федерации и заболеваемость населения этой инфекцией. Материалы и методы. В работе использованы итоговые годовые отчеты по заболеваемости КГЛ, предоставленные Управлениями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в субъектах Южного и Северо-Кавказского федеральных округов, результаты эпизоотологического мониторинга за возбудителем КГЛ на территории Волгоградской, Ростовской областей и Ставропольского края. Гидрометеорологические данные были получены из базы данных ФГБУ «ВНИИГМИ-МЦД», архивов метеостанций, а также из Государственных докладов «О состоянии окружающей среды и природопользовании в Ставропольском крае» за 2011-2016 гг. Основные результаты. Впервые определено влияние климатических факторов на развитие каждой фазы жизненного цикла иксодовых клещей H. marginatum – основного переносчика вируса ККГЛ на юге Европейской части Российской Федерации.Показана прямая корреляция значений сезонных аномалий температуры воздуха, определяющей численность иксодовых клещей, и уровня заболеваемости населения КГЛ. Установлено комплексное влияние температуры воздуха и количества выпавших осадков на формирование популяций H. marginatum (на примере Ставропольского края). Продемонстрирована корреляция периодов подъема заболеваемости КГЛ с температурными условиями, благоприятными для развития иксодовых клещей. Отрицательные значения аномалий температуры воздуха зафиксированы в годы, предшествующие снижению числа больных КГЛ. Отмечена связь между уровнем заболеваемости КГЛ и степенью увлажнения весенне-летнего и осеннего периодов предшествующего года, оказывающей влияние на жизнедеятельность, процесс метаморфоза преимагинальных фаз клещей и численность популяций H. marginatum последующей генерации.Установлена тенденция к расширению ареала возбудителя КГЛ со смещением границы в северном направлении, обусловленная влиянием климатических изменений. Обнаружение вирусофорных иксодовых клещей на территории районов Волгоградской области, граничащих с Приволжским Федеральным округом, свидетельствует о риске распространения вируса ККГЛ за пределы южных регионов Российской Федерации.

 

11
Аннотация
Внутрибольничные инфекции в акушерских стационарах характеризуются высоким уровнем заболеваемости, значительным ущербом, причиняемым здоровью новорожденных и большой социально-экономической значимостью. Цель исследования: выявить эпидемиологические особенности внутрибольничных и внутриутробных инфекций новорожденных в Российской Федерации. Материалы и методы: выборка проводилась из формы федерального статистического наблюдения № 2 «Сведения об инфекционных и паразитарных заболеваниях» за 2008-2016 гг., Единой межведомственной информационно-статистической системы. Была проанализирована заболеваемость внутриутробными и внутрибольничными инфекциями новорожденных за период с 2008 по 2016 год по субъектам Российской Федерации. Субъекты были разделены на квартили по уровню заболеваемости внутриутробными и внутрибольничными инфекциями новорожденных с учетом доверительных границ. Результаты: в Российской Федерации рост заболеваемости внутриутробных инфекций новорожденных отмечается в 30 субъектах, снижение – в 31 субъектах, отсутствие динамики – в 13 субъектах; рост заболеваемости внутрибольничных инфекций новорожденных отмечается в 7 субъектах, снижение – в 41 субъекте, отсутствие динамики – в 26 субъектах; рост соотношения внутриутробных и внутрибольничных инфекций новорожденных отмечается в 40 субъектах, снижение – в 15 субъектах, отсутствие динамики – в 19 субъектах. По представленным выше закономерностям можно выделить 9 основных групп. Наиболее многочисленной (16 субъектов) является группа, в которой наблюдается рост заболеваемости внутриутробными инфекциями, снижение заболеваемости внутрибольничными инфекциями и увеличение соотношения внутриутробных и внутрибольничных инфекций новорожденных. В подавляющем большинстве субъектов Российской Федерации регистрация случаев внутрибольничных инфекций осуществляется не в полном объеме. Можно выделить всего лишь семь субъектов с наиболее адекватной регистрацией внутрибольничных и внутриутробных инфекций новорожденных: Вологодская область, Забайкальский край, Нижегородская область, Омская область, Оренбургская область, Пензенская область, Свердловская область. Заключение: для полноценной оценки ситуации по внутрибольничным и внутриутробным инфекциям новорожденных необходимо расследование каждого случая госпитальным эпидемиологом; стандартный подход к определению случая инфекции, связанной с оказанием медицинской помощи и внутриутробных инфекций; официальная регистрация всех случаев, ответственность всех сотрудников учреждения за регистрацию случаев инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи, регулярный анализ данных с помощью научно обоснованных инструментов.
15
Аннотация

Целью настоящей работы стало изучение распространенности манифестного и оккультного вирусного гепатита В (HBV) у ВИЧ-позитивных лиц в Дальневосточном федеральном округе (ДФО), а также изучение молекулярно-эпидемиологической характеристики циркулирующих в регионе штаммов вируса гепатита В. В работе были применены серологический и молекулярно-генетический методы выявления возбудителя HBV с последующим филогенетическим анализом полученных последовательностей. По признаку наличия анти-HBcAg было установлено, что ВИЧ-позитивные пациенты более подвержены риску заражения HBV по сравнению с условно «здоровыми» лицами: 35,02% (ДИ 95: 29,59-40,45%) и 22,22% (ДИ 95:17,87-26,57%), соответственно. Распространенность маркеров текущей HBV-инфекции среди ВИЧ-позитивных лиц так же оказалась более высокой по сравнению с условно «здоровым» населением - 6,73% (ДИ 95: 3,88-9,58%) и 0,85% (ДИ 95: 0-1,81%), соответственно. При этом, HBsAg-негативная форма при манифестном течении HBV выявлена в 1,01% (ДИ 95: 0-2,15%) случаев среди ВИЧ-позитивных лиц, в то время как среди условно «здорового» населения она определена в 0,28% (ДИ 95: 0-0,84%). Установлена более частая выявляемость серологических маркеров сочетанного инфицирования вирусными гепатитами С и D в группе ВИЧ-HBV-позитивных лиц по сравнению с пациентами с хронической формой HBV, но без ВИЧ-инфекции: показатели инфицированности HCV составили 50,0% (ДИ 95: 27,46-77,46%) и 4,65% (ДИ 95: 0-10,94%), HDV – 40,0% (ДИ 95: 17,97-62,03%) и 4,65% (ДИ 95: 0-10,94%), соответственно. Наиболее распространенным генотипом HBV оказался генотип D с превалированием субтипа D2, при этом был зарегистрирован случай инфицирования генотипом С HBV (С2). Полученные результаты указывают на необходимость углубленного обследования ВИЧ-позитивных пациентов на наличие маркеров парентеральных вирусных гепатитов для снижения риска развития угрожающих жизни осложнений, а также с целью профилактики распространения инфекционных агентов в популяции.

КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ

7
Аннотация

Первичное обследование групп населения с повышенным риском заражения  инфекционными заболеваниями (ИЗ) предполагает выполнение ряда анализов с использованием моноспецифических диагностических систем и представляет собой длительную, трудоемкую и дорогостоящую процедуру. Ранее нами разработан мультиплексный тест, позволяющий оперативно и недорого проводить комплексное первичное тестирование. Создан набор, позволяющий одновременно выявлять в препаратах крови антитела к 6 возбудителям ИЗ: вирусу иммунодефицита человека, вирусам гепатитов Б и С, цитомегаловирусу, Treponema pallidum и Toxoplasma gondii. Набор основан на мультиплексном дот-иммуноанализе на плоских белковых матрицах (иммуночипах) с использованием конъюгатов коллоидного золота и серебряного проявления. Он позволяет выполнять комплексный анализ при комнатной температуре в течение 70 минут и не требует высокой квалификации оператора. В настоящей статье представлены результаты лабораторных испытаний экспериментального образца мультиплексного набора в сравнении с наборами для иммуноферментного анализа (ИФА) пяти российских производителей с использованием массива из 240 образцов препаратов крови,  включающих 200 клинических проб сывороток (плазмы) крови от больных ИЗ и 40 образцов плазмы доноров. Показано, что мультиплексный тест обладает чувствительностью и специфичностью анализа не менее 95 %, а оптические сигналы дот-анализа хорошо коррелируют с показателями оптической плотности, полученными с использованием коммерческих наборов для ИФА, и позволяют проводить полуколичественную оценку содержания специфических антител в образце. При этом мультиплексный дот-анализ более оперативен и экономичен, по сравнению с ИФА и может выполняться во внелабораторных условиях. Набор для мультиплексного дот-иммуноанализа антител может обеспечить комплексный подход к диагностике ИЗ, значительно облегчить проведение первичного тестирования, сделать его более оперативным, и доступным для пациентов.

16
Аннотация

Возможность завоза в Российскую Федерацию экзотических инфекций, в том числе и мелиоидоза, лабораторно подтвержденные случаи которого регулярно регистрируются в неэндемичных регионах мира, обуславливает необходимость разработки и совершенствования методов их ускоренной диагностики. Наличие перекрестной реактивности между филогенетически близкими видами рода Burkholderia затрудняет диагностику мелиоидоза методами экспресс-анализа, предусматривающими применение препаратов на основе моноклональных антител к эпитопам экзополисахарида возбудителя. Исследования, направленные на поиск антигенов-мишеней для создания группо- и видоспецифических иммунодиагностических препаратов нового поколения, позволяющих выявлять Burkholderia pseudomallei, не теряют актуальности. Цель работы заключалась в клонировании полных кодирующих последовательностей дифференцирующих поверхностных биополимеров Burkholderia pseudomallei с последующей оптимизацией схемы очистки рекомбинантных антигенов. В результате сравнительного in silico исследования в качестве целевых биомолекул были выбраны обладающие высокой иммуногенностью протеины внешней мембраны B. pseudomallei Omp38 и OmpA/МotB. В ПЦР были получены необходимые для клонирования специфические ампликоны генов omp38 и ompA/motB, которые лигировали с линейным экспрессирующим вектором RIC-Ready pPAL7. Лигазной смесью трансформировали компетентные клетки E. coli C-Мах5α для накопления рекомбинантных плазмидных молекул, после чего их выделяли и вводили в E.coli BL21(DE3) для высокоэффективной экспрессии рекомбинантных протеинов. По-видимому, из-за мультимерной организации белков стандартная процедура их очистки из нативного клеточного дезинтеграта оказалась неэффективной. Модификация методики очистки привела к повышению  концентрации рекомбинантного белка в элюате. Однако, ввиду привнесенных денатурирующих условий на промежуточных этапах очистки произошел гидролиз пептидных связей в молекулах целевых протеинов. Предполагаемым местом разрыва являлась ковалентная связь между аминокислотами пролин и аспарагин. В элюатах содержались N-концевые фрагменты, посредством которых рекомбинентные белки были связаны с неподвижной фазой хроматографической колонки. Аминокислотные последовательности N-концевых участков, соответствующих молекулярным массам элюированных пептидов, были оценены на предмет содержания линейных эпитопов. По результатам in silico анализа на исследуемых полипептидах было установлено присутствие ряда участков, обладающих выраженной антигенной активностью. Сконструированные штаммы E. coli BL21(DE3) BpsOmp39 и E. coli BL21(DE3) BpsOmpА являютя продуцентами поверхностных протеинов Omp38 и ОmpA/МotB возбудителя мелиоидоза, очищенные формы которых могут быть использованы в качестве основы разрабатываемых диагностических тест-систем.



Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2220-7619 (Print)
ISSN 2313-7398 (Online)